[发明专利]检测T细胞微小RNA150相对含量反映个体免疫状态的技术

权利要求书

1.一条用于微小RNA(microRNA，miR)150相对定量的引物，其特征是一条茎环引物，3’端带8个与microRNA150的5’端特异性互补的核酸序列SEQ ID NO.1，可用于逆转录miR-150。

2.根据权利要求1所述的用于对miR-150进行相对定量的一对引物，miR-150特异性引物SEQ ID NO.2，5’端有带尾的结构，其3’端与miR-150的5’端18个特异性序列相同；用于Q-PCR的对侧引物由茎环引物内包含一个高质量的引物位置为SEQ ID NO.3。

3.根据权利要求1所述的用于对miR-150进行相对定量而配套的，对内对照基因非编码RNA(non-coding RNA)U6进行检测的三条引物，包括SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.3。SEQ ID NO.4为逆转录U6的引物，其特征是茎环引物3’端带9个与U6的5’端特异性互补的核酸序列。U6特异性引物SEQ ID NO.5，其5’端有带尾的结构，其3’端针对U6的特异性序列。用于Q-PCR的对侧引物由茎环引物内包含的一个高质量的引物位置，序列为SEQ ID NO.3。

4.根据权利要求1所述的对miR150进行相对定量的一套试剂盒，其特征包括1，由下述试剂组成：

试剂A：5μM逆转录miR-150、U6的茎环引物混合液50μL；

试剂B：20U/μL M-MuLV逆转录酶，50μL；

试剂C：5×逆转录缓冲液，200μL含dNTP浓度为5mM(包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP)，Tris-HCl浓度为250mM，KCl浓度为250mM，MgCl₂浓度为20mM，50nM DTT。

试剂D：2μM通用引物100μL；

试剂E：2μM miR-150特异性引物100μL；

试剂F：2μM U6特异性引物100μL；

试剂G：5U/μL Taq DNA聚合酶，20μL；

试剂H：2×PCR缓冲液组成，包含600nM ROX，1×SYBRGreen I dye，2mM dNTPs(包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、80mM Tris-HCl、80mM KCl、40mM(NH₄)₂SO₄、6mM MgSO₄。

5.根据权利要求1所述的对miR150进行相对定量的一张评分表，其特征包括1，由下述评分组成：

评分1：T细胞免疫状态过激；评分2：T细胞免疫状态正常；评分3：T细胞免疫状态抑制；评分4：T细胞免疫状态过度抑制。