[发明专利]一种来自恶臭假单胞菌的黄素单加氧酶基因FMO及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种来自恶臭假单胞菌的黄素单加氧酶基因FMO，其核苷酸序列如SEQ ID No 1所示。

2.权利要求1所述的恶臭假单胞菌的黄素单加氧酶基因FMO的制备方法，其特征在于，利用功能互补法对来自被芳香族化合物污染的土壤中能以色氨酸为底物合成靛蓝的恶臭假单胞菌克隆、编码黄素单加氧酶(FMO)基因，并将该基因重组到大肠杆菌体内而获得，具体包括以下步骤：

1)菌种分离；

2)总DNA的提取及菌种鉴定；

3)恶臭假单胞菌黄素单加氧酶基因FMO的筛选与合成。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的芳香族化合物为萘或苯酚。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，通过基因合成方法克隆筛选与合成所述的黄素单加氧酶基因FMO。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述基因合成方法所用的引物如下：

1FMO 1：

ATGACTCTTC GTGTAGCTAT CATCGGTGCC GGCCCCTCCG GCCTTGCGCA ACTGCGTGCC

2FMO-2：

GATTTGCGGC ATGGCGGCGC CCTGGGCATG GGCGGACTGG AAGGCACGCA GTTGCGCAAG

3FMO-3：

GCCGCCATGC CGCAAATCGT CTGCTTCGAA AAGCAGGCCG ACTGGGGCGG CATGTGGAAC

4FMO-4：

CACCGGCTCG CCATGCTGGT CGAGTCCGGT GCGCCAGGTG TAGTTCCACA TGCCGCCCCA

5FMO-5：

CAGCATGGCG AGCCGGTGCA CGGCAGCATG TACCGCTACT TGTGGTCCAA CGGCCCCAAG

6FMO-6：

GAAATGTTCA TCGAAGCTG TAGTCGGCGA ACTCCAGGCA CTCCTTGGGGC CGTTGGACCA

7FMO-7：

AGCTTCGATG AACATTTCG GCCGGCCAAT CTCCTCATAT CCGCCGCGCGA GGTGCTGTGG

8FMO-8：

ATCGCGCACC CCGGCTTTT TTCACGCGGC CCTGGATGTA GTCCCACAGCA CCTCGCGCGG

9FMO-9：

AAAGCCGGGG TGCGCGATT TCATCCGCTT CAATACCGTG GTCAAGCACGT CAGCTTCAAT

10FMO-10：

GCCGTAGTCA TGGGCGCTG ACGGTGAACT CGCGTGTCTG CTCATTGAAGC TGACGTGCTT

11FMO-11：

AGCGCCCATG ACTACGGCG CAGGGGTCGG CATCGAGCAG GTGTTCGACTA CGTGGTGGTC

12FMO-12：

TTCGAACTCC GGCACATGCG GGGTGGAGA AGTGGCCACT GGCGACCACCA CGTAGTCGAA

13FMO-13：

CATGTGCCGG AGTTCGAAGG CTTCGAGCG TTTCACCGGG CGTATCCTGCA CGCCCACGAT

14FMO-14：

GATGAGCAGG TCCTGGCCCT TGAATTCCA CCGCTTCACG AAAATCGTGGG CGTGCAGGAT

15FMO-15：

GGCCAGGACC TGCTCATCGT TGGCAGCA GTTATTCCGCC GAAGACATAGG TTCGCAGTGC

16FMO-16：

GGTACGTTAG GCCGTGGTGA TCGACCGTGC ACCGTACTT GTAGCACTGCG AACCTATGTC

17FMO-17：

ACCACGGCCT AACGTACCCA GGCCGATGGG GCTTCAAGTG GCCCACGGGG TGGGAAGAGC

18FMO-18：

CGAAGAACGC CAGGTCGTTC TCGACCCTGA CCAGTTGCGG ACGCTCTTCC CACCCCGTGG

19FMO-19：

ACGACCTGGC GTTCTTCGCC GATGGATCGA GCAAGCGCAT CGACGCAATC ATCCTGTGCA

20FMO-20：

TCAGCTCATC CGGCAGGAAC GGGAAGTGAT GCTGGTAGCC CGTGCACAGG ATGATTGCGT

21FMO-21：

TCCTGCCGGA TGAGCTGACC CTCAAGACCA ACAACCGCCT GTGGCCTGCG GGGCTCTACC

22FMO-22：

CCAGGTAGAG CAACTGCGGG TTCTGCTCCC AGACCACGCC TTGGTAGAGC CCCGCAGGCC

23FMO-23：

CGCAGTTGCT CTACCTGGGC ATGCAGGACC TCTGGTACAG CTTCAACCTG TTCGACGCCC

24FMO-24：

GCTGCAGGCG CCCCAGCATA TAGTCGCGTG CAAACCATGC CTGGGCGTCG AACAGGTTGA

25FMO-25：

TGCTGGGGCG CCTGCAGCTA CCGCCCAAGG CGGACATGCA AGCCGACAGC AAGCGCTGGC

26FMO-26：

CATACATCGA GGCTGTGGTT TCCAGACGCT CCTCATCCTC GCGCCAGCGC TTGCTGTCGG

27FMO-27：

CCACAGCCTC GATGTATGAG TTCCAGGGTC GATACATCAA GCACCTGATC GAGCAGACCG

28FMO-28：

GGAAGATGCG ATTGACCGCA TCGATGTCGA AGCTTGGGTA ATCGGTCTGC TCGATCAGGT

29FMO-29：

CGGTCAATCG CATCTTCCTG CAATGGAAGC AGGACAAGAA GCACGACATC ATGGGCTATC

30FMO-30：

CTGCTTTCGT GCCGGTGATC ACCGAGCGGT ACGACTTGTC GCGATAGCCC ATGATGTCGT

31FMO-31：

TCACCGGCAC GAAAGCAGTG CCCCACCATA CCCGCTGGAT GCAGGCGCTG GACGACTCGC

32FMO-32：

CCTCACCTTG CTTGCCGTCC GTTTCGCGCA GGTATTCCTG CAGCGAGTCG TCCAGCGCCT

33FMO-33：

ACGGCAAGCA AGGTGAGGTG AAGGCCCTGC GCCGGTAG

34FMO-34：

CTACCGGCGC AGGGCCTTCA    。

6.权利要求1所述的来自恶臭假单胞菌的黄素单加氧酶基因FMO在靛蓝合成中的应用。