[发明专利]抑制厚朴愈伤组织褐化的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物细胞工程技术领域，更具体涉及一种抑制厚朴愈伤组织褐化的方法。

背景技术

厚朴是我国特有的、常用的珍贵中药材，被列为国家珍稀濒危植物和二级保护中药材  药用厚朴包括厚朴(Magnolia officinalis Rehd. et Wils. subsp. officinalis)和凹叶厚朴（M. officinalis subsp. biloba (Rehd. et Wils.) Law）及其中间类型(刘玉壶等，1996)。厚朴药材含挥发油成分30余种、酚性化合物9种、生物碱9种以及一些其它化学成分。其中，厚朴酚（Magnolol，5,5^’-di-2-propenyl-1,1^’-biphenyl-2,2^’-diol）及其异构体和厚朴酚（Honokiol，3^’,5-di-2-propenyl-1,1^’-biphenyl-2,4^’-diol）占绝对优势。一直以来评价厚朴药材品质优劣主要利用这二种酚的含量。厚朴具有抗病毒、抗肿瘤、防龋、抗菌、抗溃疡、肌肉松弛、抗痉挛、镇痛、抗炎及毒性等药理作用（王承南和夏传格，2003)。厚朴因其特殊的分类地位和资源的日益枯竭而先后被列为国家珍稀濒危植物和二级保护中药材（傅立国，1991）。

据研究，厚朴的人工栽培受种源、栽培气候等诸多因素的影响，而且不同树龄厚朴酚含量差异很大，这直接影响厚朴药材的产品质量、采收次数及厚朴酚的产量（赵中振等，1992；曾燕如等，1999；）。另外，我国的可耕地面积有限，这也制约了其大面积栽培。因此，唯有利用植物组织和细胞培养技术来获得更多的厚朴酚才是解决这一问题的根本途径。

目前，国内外有关厚朴组织培养方面的研究报道甚少，而且厚朴属于木兰科植物，在组织培养过程中褐化现象非常严重，导致抑制愈伤组织的生物量增加，甚至其逐步死亡，影响后续研究工作的开展。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抑制厚朴愈伤组织褐化的方法。该方法操作简便，抑制褐变效果好，为探究厚朴愈伤组织悬浮培养及厚朴酚规模化生产提供新的方法。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术措施：

步骤一，将消毒好的子叶接入配制好的培养基中，培养基的有效成分为：MS（Murashige-Skoog）培养基和附加成份，附加成份为2,4-D(2,4-dichlorophenoxy acetic acid) 0.5～1.0mg/L、NAA(a-naphthalene acetic acid) 0.1～0.5mg/L、PVP（Polyvinylpyrrolidone） 0.5～3.0g/L、琼脂6.0～8.0g/L、蔗糖15～35 g/L，暗培养24天，温度为24～26℃；

步骤二，诱导出的愈伤组织转到步骤一所述的培养基组分上再添加谷氨酰胺0.15～0.35g/L和水解硌蛋白0.1～0.3mg/L，暗培养24天，培养温度为24～26℃。

本发明具有如下的优点或效果

1、有关本发明的效果请见下表：

2、本发明无需增加专用设备，操作方便，同时促进愈伤组织的快速生长。

下面对本发明的实施例作进一步详细描述：

一种抑制厚朴愈伤组织褐化的方法，它采用如下步骤：

步骤一，以厚朴种子播种后萌发出的子叶为外植体，用洗洁精清洗，用75%酒精浸泡20或25或30秒，用0.1%氯化汞消毒5或6或7分钟，用无菌水冲洗4或5或6次；

步骤二，将消毒好的子叶接入配制好的培养基中，培养基的有效成分为：MS（Murashige-Skoog）培养基和附加成份，附加成份为2,4-D(2,4-dichlorophenoxy acetic acid) 0.75mg/L、NAA(a-naphthalene acetic acid) 0.2mg/L、PVP（Polyvinylpyrrolidone） 2.0g/L、琼脂7.4g/L、蔗糖30 g/L，暗培养24天，温度为24或25或26℃；

步骤三，诱导出的愈伤组织转到步骤二所述的培养基组分上添加谷氨酰胺0.15～0.35g/L和水解硌蛋白0.1～0.3mg/L，暗培养24天，温度为24或25或26℃；

实施例1：