[发明专利]快速检测16、18型人乳头瘤病毒的荧光定量PCR试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种引起人类宫颈癌及宫颈上皮内高度病变的病原体基因检测技术，尤其涉及一种快速检测16、18型人乳头瘤病毒荧光定量PCR(聚合酶链式反应)试剂盒，适用于16、18型人乳头瘤病毒的定性定量检测。

背景技术

人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是一类严重危害人类健康、引起人类多种疾病的常见病原体。该病毒是一种双链的小DNA病毒，具有7900个碱基对，属于乳多空病毒科，目前已鉴定出超过200种亚型，有54种可以感染生殖道黏膜。HPV是乳头瘤病毒中最具多样性的一类，约30种不同型HPV可以感染生殖系统的上皮细胞，命名为“生殖型”的HPV。根据HPV致癌的危险性把HPV分为低危型和高危型，其中HPV16型和HPV18型是最常见的、具有代表性的高危型，60％以上的宫颈病变和宫颈癌中检测到HPV16或HPV18的感染。HPV主要通过直接或间接接触污染物品或性传播感染人类，病毒侵入人体后，停留于感染部位的皮肤和粘膜中，不产生病毒血症。

近年研究资料证明HPV与宫颈癌、喉癌、舌癌等发生有关。如HPV16、18等型与宫颈癌的发生关系密切。宫颈癌是世界范围女性第二大恶性肿瘤，也是目前为止最可靠的已知为病毒起源的恶性肿瘤之一，发展中国家的发生率是发达国家6倍。近年来，由于宫颈癌病因学研究的突破，研究已确认宫颈癌是感染性疾病，并确立人乳头瘤病毒(HPV)感染是宫颈癌的主要病因，99.7％的宫颈癌都可检测到高危HPV的DNA，HPV阴性者几乎不会发生宫颈癌(99％NPV)。特别是近年由于HPV感染增加，现有的防治措施缺乏力度，患者明显年轻化。HPV感染持续存在最终致宫颈癌变，故宫颈癌是可预防的特殊癌症。因此建立有效的HPV核酸检测技术对该类患者监控和诊断，跟踪宫颈病变治疗的预后，对宫颈癌的预防和早期诊断治疗有着十分重要的意义。

近年来发展起来的荧光定量PCR(Fluorescence Quantitative PCR，FQ-PCR)技术以其灵敏度高、速度快、特异性强等优点在基因表达水平分析(Development and evaluation of a PCR and mass spectroscopy(PCR-MS)-based method for quantitative，type-specific detection of human papillomavirus[J].Journal of Virological Methods 160(2009)78-84；Comparison between the Hybrid Capture 2 and the hpVIR real-time PCR for detection of human papillomavirus in women with ASCUS or low grade dysplasia.[J].Journal of Clinical Virology 45(2009)85-89)和定量检测(Detection and quantitation of HPV in genital and oral tissues and fluids by real time PCR[J].Virology Journal 2010，7：194；Evaluation of a Prototype Real-Time PCR Assay for Carcinogenic Human Papillomavirus(HPV)Detection and Simultaneous HPV Genotype 16(HPV16)and HPV18 Genotyping.[J].journal of cl inicai microbiology OCT 2009，47：103344-3347)等方面得到广泛应用，并且已经成为当前病毒核酸定量的主要方法，国内目前已有关于丙肝、乙肝、淋球菌、支原体、衣原体、艾滋病、结核定量检测的试剂盒上市。

临床检测上传统的培养法和血清学方法具有灵敏度低、特异性差、假阳性、耗时费力等缺点；常规PCR法虽然有简便、快速、灵敏的优势，但是有不能精确定量和PCR后处理产生污染导致的假阳性等问题；因此焏待开发精确、灵敏、快速和无污染的临床检验方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的缺点和不足，提供一种快速检测16、18型人乳头瘤病毒的荧光定量PCR试剂盒。

本发明采用以下技术方案：

一、PCR试剂盒