[发明专利]快速检测16、18型人乳头瘤病毒的荧光定量PCR试剂盒

权利要求书

1.一种快速检测16、18型人乳头瘤病毒的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：

该试剂盒包括DNA裂解液、荧光定量PCR反应液、HPV16&18标准阳性模板PMD18-T-HPV16&18和阴性质控标准品；

所述的荧光定量PCR反应液含有16、18型人乳头瘤病毒特异性引物对和荧光探针：

16、18型人乳头瘤病毒的正向引物为5′-SWGYWGCAGCAYTATATTGG-3′，反向引物为5′-ATGTTGTAWWAYWGTWWGTCTTTG-3′，其中正向引物可向5’和3’端方向各延伸10个碱基，反向引物可向5’和3’端方向各延伸10个碱基；

荧光探针序列为5′-CAYTCWGGYGTGTCTCC-3′，该荧光探针序列可向5’和3’端方向各延伸10个碱基，荧光探针5′端标记报告荧光基团FAM，3′端标记不发光的淬灭基团标记Eclipse，可以大大减少背景噪音的干扰；

所述的HPV16&18标准阳性模板PMD18-T-HPV16&18是含有16、18型人乳头瘤病毒高度保守基因-E1基因的101个碱基对的核苷酸片段构成的PMD18-T载体，该载体在大肠杆菌DH5α中增殖。

2.按权利要求1所述的PCR试剂盒，其特征在于DNA裂解液包含：

50mmol/L NaOH，10mmol/L Tris-HCl，pH 8.0，体积分数为1％Triton X-100，体积分数为1％NP-40，0.5mmol/L EDTA pH 8.0。

3.按权利要求1所述的PCR试剂盒，其特征在于荧光定量PCR反应液包含：

PCR 10×buffer 5.0μl，10μmol/L的正向引物和反向引物各1.5μl，5μmol/L的荧光探针1.5μl，25mmol/L的MgCl₂12.5μl，10mmol/L的dNTPs 1.0μl，2.5U/μl的Taq DNA聚合酶1.0μl，无菌双蒸水26μl。

4.按权利要求1所述的PCR试剂盒，其特征在于HPV16&18标准阳性模板PMD18-T-HPV16&18包含的E1基因的核苷酸序列为：

SWGYWGCAGCAYTATATTGGTATARAACAGGWATATCAAATATTAGTGAAGTRWWKGGAGACACRCCWGARTGGATACAAAGACWWACWRTWWTACAACAT；

S：C或G；W：A或T；Y：C或T；R：A或G；K：T或G。

5.按权利要求1所述的PCR试剂盒，其特征在于阴性质控标准品为：无菌双蒸水。