[发明专利]一种抗凝血鼠药大隆分子印迹聚合物及其作为固相萃取剂的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗凝血鼠药大隆分子印迹聚合物及其作为固相萃取剂的应用，属于分析化学与材料科学技术领域。

背景技术

近年来，大隆、溴敌隆等抗凝血鼠药引发的投毒、自杀、误服等刑事案件屡见不鲜，生物样本中大隆、溴敌隆的分析检验至关重要。但由于司法鉴定领域毒物分析检材复杂多样、杂质干扰严重等，在腐败生物样本(如体液、毛发或脏器组织)中的高效分离、提取仍然是目前法医毒物分析工作者们研究的热点和难点。

近年来开发的分子印迹术，为法医毒物分析毒物的提取、分离提供了新思路和新途径。分子印迹聚合物(MIPs)具有预定性、识别性、实用性三大特点，对目标分子的空间结构具有“记忆”效应，能够高选择性识别复杂样品中的印迹分子，这些特点使得MIPs能够成为非常有吸引力的特异性吸附材料，已在分离领域有广泛的应用研究。分子印迹固相萃取(MISPE)技术是将分子印迹聚合物作为固相萃取剂，集分子印迹技术与固相萃取技术于一体，为样品的采集、富集和分析提供了极大的方便，克服了生物或环境样品体系复杂、预处理手续繁杂等不利因素，适用于腐败生物样本中目标物的提取分离、净化。

有关大隆分子印迹聚合物的制备及其在样本前处理中的应有还未见相关文献报道。

发明内容

本发明的目的是为了解决已有技术中复杂样本中大隆等抗凝血鼠药提取分离困难的问题，提出一种抗凝血鼠药大隆分子印迹聚合物及其作为固相萃取剂的应用。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的。

本发明的一种抗凝血鼠药大隆分子印迹聚合物，该分子印迹聚合物的制备方法为：

1)采用大隆作为模版分子，同功能单体在溶剂中混匀，混匀后在4℃以下保存24h形成预聚体；然后在常温下加入交联剂和引发剂，在4℃以下、用波长为260nm的紫外光引发聚合24h，得到球形颗粒聚合物；

功能单体为丙烯酰胺，溶剂为二甲基亚砜；交联剂为三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯TRIM，引发剂为偶氮二异丁腈；功能单体、模板分子和溶剂的摩尔比为4∶1∶20；交联剂的体积用量为溶剂的1.6％，引发剂的摩尔用量为模版分子的4％；

2)用有机溶剂甲醇/甲酸浸泡步骤1)得到的球形颗粒聚合物并搅拌2h，球形颗粒聚合物中的模板分子溶解在有机溶剂甲醇/甲酸中，然后离心分离去除有机溶剂甲醇和乙酸；甲醇与甲酸的体积比为9∶1；

3)重复步骤2)2次以上；

4)经步骤3)清洗后的球形颗粒聚合物中加入乙醇，洗涤除去甲酸；

5)重复步骤4)2次以上；

6)经步骤5)清洗后的球形颗粒聚合物中加入丙酮，以除去细小颗粒，然后真空干燥，得到大隆分子印迹聚合物。

本发明的一种抗凝血鼠药大隆分子印迹聚合物作为固相萃取剂的应用，具体步骤为：

1)大隆分子印迹固相萃取柱的制备：

将制备的大隆分子印迹聚合物溶于甲醇中制成悬浮液，搅拌均匀后缓慢注入带有20μm筛板的聚乙烯空固相萃取柱中，真空抽吸使大隆分子印迹聚合物在空固相萃取柱中分布均匀，然后在大隆分子印迹聚合物上方装入20μm筛板，大隆分子印迹聚合物与甲醇的比50mg∶5mL；

2)制备样品：

取血液1mL，用2mL甲醇沉淀混旋，用6mL去离子水稀释，离心，取清液；

3)大隆分子印迹固相萃取方法：

依次用1mL甲醇、1mL甲醇/水混合溶剂活化大隆分子印迹固相萃取柱，然后将步骤2)制备的样品上固相萃取柱，然后再用2mL甲醇/水混合溶剂洗涤，最后用2mL甲醇/甲酸混合溶剂洗脱，收集洗脱液，在空气流下挥干，然后用200μL的甲醇溶解残渣，最后用LC、LC-MS分析；

甲醇/水的体积比为3∶7，甲醇/甲酸的体积比为9∶1。

有益效果

本发明的制备方法简便、快速，对结构相似物大隆、溴敌隆有很好的吸附性能，具有高度专一性和吸附选择性，为复杂基质中抗凝血鼠药大隆、溴敌隆的快速筛查、提取分离提供新手段，具有广阔的应用前景，有望实现工业化生产并投入实际应用；建立的分子印迹固相萃取方法，操作简单，对目标物选择性的吸附，对复杂基质中目标物的提取分离起到净化作用，有效去除基体杂质，提高了分离精度，降低了检测限，适用于法庭科学领域腐败生物样本中抗凝血鼠药大隆、溴敌隆的提取分离。

具体实施方式

以下的实施案例在于详细说明本发明，而非限制本发明。

实施例

一种抗凝血鼠药大隆分子印迹聚合物，该分子印迹聚合物的制备方法为：