[发明专利]一种植物中总核酸的同步提取方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种植物中总核酸的同步提取方法，具体涉及一种从烟草叶片中同步提取基因组DNA和总RNA的方法。

背景技术

基因组DNA以及总RNA提取的质量，在植物分子生物学研究中具有重要的作用，关系到后续分子生物学研究的成功与否，如基因的克隆、基因上游启动子序列的分离、southern印迹分析、表达特性的研究等。烟草叶片中的蛋白质、糖类、色素、烟碱、酚类等物质含量较高，在基因组DNA和总RNA的提取过程中，这类物质常与核酸形成复合物，使核酸在这种粘稠的胶状物中难以溶解且产生程度不同的褐变，并且这些物质容易与核酸共沉淀，使提取的核酸中含有蛋白和多糖类物质，对后续研究造成干扰。目前，关于植物基因组DNA的提取方法主要有试剂盒法和CTAB法，总RNA提取的方法有商业试剂盒、Trizol法、CTAB法、SDS法和热硼酸盐法等。虽然植物基因组DNA和总RNA提取的技术已经非常的成熟，但是大多都只是在植物中分别进行提取这两种核酸，对于从植物中同步提取DNA和RNA较少，并且采用的都是两步沉淀法，先沉淀RNA后，再沉淀DNA，耗时较长。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种植物中总核酸的同步提取方法。

本发明的另一目的是提供一种植物中基因组DNA的提取方法。

本发明的又一目的是提供一种植物中总RNA的提取方法。

一种植物中总核酸的同步提取方法，将生物材料粉碎后与2％CTAB裂解液混合，65℃水浴45-60min，加入与所述的2％CTAB裂解液等体积的由氯仿和异戊醇组成的混合试剂，上下颠倒混匀；离心，取上清，加入与上清液等体积的由水饱和酚、氯仿及异戊醇组成的混合试剂，上下颠倒混匀；离心，取上清，加入1/30上清液体积的NaAc和1/10上清液体积的无水乙醇，上下颠倒混匀，在冰上静置5min后，再加入与上清液等体积的由氯仿和异戊醇组成的混合试剂；离心，取上清，加入1/10上清液体积的NaAc和两倍上清液体积的无水乙醇，-20℃静置1h；离心，弃上清，用70％的乙醇洗涤沉淀1～5次，室温干燥，得到包含基因组DNA和总RNA的总核酸。

其中，所述的由氯仿和异戊醇组成的混合试剂中氯仿和异戊醇的体积比为20～30∶1，优选24∶1。

所述的由水饱和酚、氯仿及异戊醇组成的混合试剂中水饱和酚、氯仿及异戊醇的体积比为20～28∶20～28∶1，优选25∶24∶1。

所述的生物材料粉碎是通过在液氮中将生物材料研磨成粉末，所述的离心条件为8000～12000rpm，8～15分钟。

所述的植物优选果树或烟草，进一步优选烟草。

一种植物中基因组DNA的提取方法，包括如下步骤：

(1)按照上述植物中总核酸的同步提取方法提取植物中的总核酸；

(2)取步骤(1)提取的总核酸，按照常规方法进行RNA的消化，得到所述的基因组DNA。

其中，所述的由氯仿和异戊醇组成的混合试剂中氯仿和异戊醇的体积比为20～30∶1，优选24∶1；所述的由水饱和酚、氯仿及异戊醇组成的混合试剂中水饱和酚、氯仿及异戊醇的体积比为20～28∶20～28∶1，优选25∶24∶1。

所述的生物材料粉碎是通过在液氮中将生物材料研磨成粉末，所述的离心条件为8000～12000rpm，8～15分钟。

所述的常规消化RNA的方法优选佟兆国，王富荣，章镇，等.一种从果树成熟叶片提取DNA的方法[J].果树学报，2008，25(1)：122～125。

一种植物中总RNA的提取方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)按照上述植物中总核酸的同步提取方法提取植物中的总核酸；

(2)取步骤(1)提取的总核酸，按照常规方法进行DNA的消化，得到所述的总RNA。

其中，所述的由氯仿和异戊醇组成的混合试剂中氯仿和异戊醇的体积比为20～30∶1，优选24∶1；所述的由水饱和酚、氯仿及异戊醇组成的混合试剂中水饱和酚、氯仿及异戊醇的体积比为20～28∶20～28∶1，优选25∶24∶1。

所述的生物材料粉碎是通过在液氮中将生物材料研磨成粉末，所述的离心条件为8000～12000rpm，8～15分钟。

本发明核酸同步提取方法的原理如下：