[发明专利]一种用于揭示实蝇种群遗传多样性的分子反应体系有效
| 申请号： | 201010582967.7 | 申请日： | 2010-12-10 |
| 公开（公告）号： | CN102071255A | 公开（公告）日： | 2011-05-25 |
| 发明（设计）人： | 余德亿;姚锦爱;胡建峰;陈峰 | 申请（专利权）人： | 福建省农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350013 福建省福州市晋安*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 揭示 种群 遗传 多样性 分子 反应 体系 | ||
1.一种用于揭示实蝇种群遗传多样性的分子反应体系，其特征在于：所述分子反应体系，总体积为25μl：模板DNA 50ng，dNTP 200 μmol/L，10×PCR Buffer 2.5μl，引物0.25μmol/L，Taq 酶0.5U，最后加ddH2O至25μl；ISSR扩增反应程序：94℃预变性5min；94℃变性30s；52℃退火45s，72℃延伸90s；共36个循环；最后72℃延伸10min。
2.根据权利要求1所述的用于揭示实蝇种群遗传多样性的分子反应体系，其特征在于：所述模板DNA的制备如下：
取实蝇成虫，加入800μl提取缓冲液,于冰浴中充分研磨后移入1.5 ml Eppendorf管中，加0.5mg/ml蛋白酶K，混匀后于65℃水浴1h，加入8mol/L KAc100μl，使其充分混匀，然后冰浴1h，4℃下12000r/min离心20min，取上清液加入800μl预冷的无水乙醇，混匀，冰浴2h，12000r/min离心20min，取沉淀用70%的乙醇洗涤1次，5000r/min离心5min，沉淀于37℃干燥4～6min，最后加入10μl RNA酶和40μl TE溶解，37℃水浴1h,4℃保存备用；所述提取缓冲液配制为：0.1mol/L Tris-HCl，0.1mol/L NaCl，0.2mol/L蔗糖，0.05mol/L EDTA，0.5% SDS。
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