[发明专利]鉴定花椰菜抗黑腐病的特异引物Ⅱ及鉴定方法

权利要求书

1.鉴定花椰菜抗黑腐病的特异引物II，其特征在于它由引物序列II-S：5’ATACAGGCACAGACACACTCGC3’和引物序列II-A：5’TGTCCCTCCCTCAAAGCCATCT3’组成。

2.一种使用权利要求1的鉴定花椰菜抗黑腐病的方法，包括如下步骤：(1)提取花椰菜基因组DNA；(2)基因组DNA的0.8％琼脂糖凝胶电泳检测；(3)特异引物PCR扩增，在PCR扩增专用离心管中加入：PCR缓冲溶液、dNTP、引物序列II-S和引物序列II-A、花椰菜基因组DNA、Taq聚合酶、无菌水补至25微升，将装有上述液体的PCR专用薄壁离心管放入PCR扩增仪中，扩增条件为：94℃变性180秒，后进行94℃变性30秒，56℃退火45秒，72℃延伸60秒的扩增循环，循环数为30，最后在72℃延伸480秒，扩增完成。(4)PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳检测：配置1.2％的琼脂糖凝胶，在凝胶中加入溴化乙锭(0.5微克/毫升)；在5微升扩增产物及标准阳性Marker中分别加入1微升6×上样缓冲液，混匀，用移液器将上述混合液分别加入浸没TBE电泳液的琼脂糖凝胶的点样孔中，120V恒电压，电泳1800秒后停止电泳。凝胶直接在紫外灯下(紫外波长265nm)或在凝胶成像仪上进行观察。(5)结果判读：依照标准阳性Marker带在凝胶上的迁移位置和PCR产物的迁移位置判断花椰菜抗、感黑腐病情况。