[发明专利]一种抗菌肽天蚕素饲料添加剂的制备方法无效
| 申请号： | 201010580422.2 | 申请日： | 2010-12-09 |
| 公开（公告）号： | CN102093998A | 公开（公告）日： | 2011-06-15 |
| 发明（设计）人： | 张燕君;孙冰玉;刘增英 | 申请（专利权）人： | 山东大学 |
| 主分类号： | C12N15/09 | 分类号： | C12N15/09;C12N1/19;C12P21/02;A23K1/16;C12R1/85 |
| 代理公司： | 济南金迪知识产权代理有限公司 37219 | 代理人： | 赵会祥 |
| 地址： | 250100 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 抗菌 天蚕 饲料添加剂 制备 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种抗菌肽天蚕素饲料添加剂的制备方法，步骤如下：
(1)将抗菌肽天蚕素基因和多拷贝整合表达载体分别用Not I酶切，然后用DNA连接酶连接后，转化E.coli TOP10菌株，涂布LB平板，利用Not I进行酶切验证，经分析测序，选取反向插入cecA1片段的转化子命名为pYIP-cecA1；
(2)将步骤(1)制得的pYIP-cecA1用Hpa I酶切，回收大片段后，加入到80μL酵母电转化感受态细胞，将混合物电击后，经G418的YEPD平板的筛选，获得表达天蚕素的酵母细胞；
(3)培养步骤(2)制得的表达天蚕素的酵母细胞，经干燥，制得抗菌肽天蚕素饲料添加剂。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中电转化的电击时间为3.5～4.0ms。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，上述步骤(3)中的培养条件：在无选择压力的YEPD培养基中28～30℃培养2～3天。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，上述步骤(2)中的酵母为具有絮凝性的野生型酿酒酵母ABXL-1D，菌种购自美国ATCC公司。
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