[发明专利]一种防治桃红颈天牛的大型真菌杀虫剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物农药，特别是涉及一种防治园林蛀干害虫桃红颈天牛的微生物源大型真菌杀虫剂及其制备方法。

背景技术

桃红颈天牛是一类危害性十分严重的蛀干害虫，它的危害主要是幼虫蛀蚀桃树、杏树和樱桃等核果类树干，在木质部形成弯曲的隧道，破坏韧皮部和木质部，造成树皮脱落、树势衰弱、枝干易折，常引起整株树枯死，是公认的、最难防治的害虫。

目前用于防治桃红颈天牛的微生物源真菌杀虫剂主要是白僵菌杀虫剂，此杀虫剂是由白僵菌孢子粉制成的活菌制剂，作用机理是白僵菌的活孢子侵入桃红颈天牛幼虫体内后形成大量菌丝并产生生物毒素使昆虫死亡。此杀虫剂具有易降解、无药物残留、不杀害虫的天敌、害虫不产生抗药性等优点，但是存在以下不足：1、致死率不高，幼虫死亡率低，仅为22.6%；2、对桃红颈天牛的幼虫毒杀选择性差，而对菜青虫和松毛虫针对性强；3、药效时间短，不耐高温，当温度高于28℃时孢子即失活，高温季节使用效果不好。

大型真菌是菌物中能形成大型子实体的一类真菌，子实体的大小足以让肉眼辨识和徒手采摘。大型真菌种类繁多，有些种类可以食用，具有较高的营养价值和药用价值，如香菇、金针菇、灵芝、冬虫夏草等；还有些种类不能食用，因为含有生物毒素，是大型有毒真菌，俗称毒蘑菇。据统计已知的大型有毒真菌有129种，这些大型真菌虽然不能食用，但是具有较高的药用价值，如有的种类含有忌避、拒食、毒杀害虫的生物毒素，这些毒素是天然产物，具有易降解、种类多、活性强、与环境相容性好、易与其他药物混配、合理使用对人畜安全等优点，倍受人们高度重视，研制开发大型真菌杀虫剂将成为生物农药研究的热点。目前尚未发现大型真菌杀虫剂在防治桃红颈天牛中的应用。

发明内容

本发明提供的是一种防治桃红颈天牛的大型真菌杀虫剂，该大型真菌杀虫剂对防治桃红颈天牛具有致死率高、选择性强、药效时间长和耐高温的特点。

本发明的目的是这样实现的：一种防治桃红颈天牛的大型真菌杀虫剂，其组分及含量为：40%褐鳞环柄菇毒肽类毒素粗品，35%条纹毒鹅膏菌毒肽类毒素粗品和25%10目的菌糠粉。

一种防治桃红颈天牛的大型真菌杀虫剂，其制备方法为：

1、大型真菌的筛选

从大型真菌中筛选含有毒肽类毒素的褐鳞环柄菇和条纹毒鹅膏菌母种试管各1支。

2、摇床液体深层发酵

（1）、液体培养基：马铃薯200克、葡萄糖20克、NaNO₃3克、KH₂PO₄1克、KCl0.5克、MgSO₄·7H₂O0.05克、FeSO₄0.01克、蒸馏水1000毫升、PH7.0。

（2）、取两个容量为1000毫升的三角瓶，贴上标签，标明A瓶、B瓶，然后分别向A瓶、B瓶中加入液体培养基500毫升。在121℃~126℃、0.1兆帕下灭菌15~20分钟。

（3）、接种：在超净工作台上操作。首先用移液管分别取5毫升无菌水加入到褐鳞环柄菇和条纹毒鹅膏菌母种试管种中，随后用接种针在试管斜面上刮取菌落，洗脱菌丝制成褐鳞环柄菇和条纹毒鹅膏菌菌悬液各5.5毫升，然后将褐鳞环柄菇菌悬液倒入A瓶中，将条纹毒鹅膏菌菌悬液倒入B瓶中。

（4）、摇床液体深层发酵：将A瓶褐鳞环柄菇菌悬液和B瓶条纹毒鹅膏菌菌悬液置于摇床上，在温度26~28℃、转速110转／分钟的条件下深层发酵7~10天。

3、超声破碎、冷冻离心处理发酵液

将A瓶褐鳞环柄菇发酵液和B瓶条纹毒鹅膏菌发酵液分别用JY99-2D超声波细胞粉碎机，在功率200瓦，工作间歇1秒／1秒的条件下对菌丝和细胞进行破碎处理，再以10000转／分钟冷冻离心，分离上清液，滤渣用1~3倍量无菌水清洗三次，最后合并上清液，弃去残渣，A瓶褐鳞环柄菇发酵液离心得上清液486毫升；B瓶条纹毒鹅膏菌发酵液离心得上清液483毫升。

4、毒肽类毒素粗品的提取

首先向486毫升褐鳞环柄菇的上清液和483毫升条纹毒鹅膏菌的上清液中分别加5~8倍量95%甲醇，在室温下充分搅拌1~3小时，然后在50~60℃下用旋转蒸发仪加热减压浓缩，结果得褐鳞环柄菇的毒肽类毒素粗品18.4克，回收率3.8%；条纹毒鹅膏菌的毒肽类毒素粗品20.2克，回收率4.2%。

5、载体的选择与处理

载体选用袋料栽培香菇的废料菌糠。首先将菌糠烘干粉碎，然后过筛成10目的菌糠粉备用。

6、成型