[发明专利]吗啡-氯胺酮胶体金法毒品检测试卡

说明书

技术领域

本发明涉及一种二合一毒品检测试卡。

背景技术

近年来吸毒人数均呈上升趋势，从我国公安部禁毒委员会了解到，截止到目前为止，全国吸毒人数仅登记注册的就达近100万人。其中70%—80%吸食吗啡、海洛因、鸦片类，其余20%-30%吸食氯胺酮和摇头丸。保守估计我国吸毒人数在300-500万人。海洛因、吗啡等鸦片类毒品是罂粟胶质中的提取物或衍生物，在体内经过代谢可以转变成吗啡和吗啡代谢物。因此尿液中吗啡和吗啡代谢物的存在表明尿样提供者体内存在鸦片类毒品。氯胺酮用作毒品时称为K粉，具有一定的精神依赖性。近年来在娱乐场所滥用日趋严重，严重威胁健康。人体服用的氯胺酮有70％—90％在肝内代谢并经尿液排出，一般在吸食后2－4小时内即可被检出。

随着我国禁毒工作的深入，需要接受毒品吸食普查人数也在成倍的增加。公安部要求，吸毒人员进戒毒所前必须做尿检，治疗期间需追踪复查，出戒毒所后每人每年要复查6次。以往单一检测操作繁琐、费用昂贵的弊端，给缉毒人员在一线工作时带来不便。传统的同位素法检测对于操作者及环境的污染极为严重;酶免疫定量检测法需要较复杂仪器,不利于犯罪现场检测。

发明内容

本发明提供一种吗啡-氯胺酮胶体金法毒品检测试卡，该毒品检测试卡可同步检测氯氨酮、和吗啡等两种毒品，并且快速、准确和节省检材。

本发明的目的是这样实现的：

本发明由一个封闭的塑料外壳包装而成,该外壳的上层开有显色孔和加样孔,在外壳内腔装有磁白板，磁白板上覆有膜结构，膜结构由下至上依次叠放样品垫，吸水纸, 玻璃纤维素膜和硝酸纤维素膜。其中玻璃纤维素膜上包被有胶体金标记鼠抗氯胺酮单克隆抗体和胶体金标记鼠抗吗啡单克隆抗体。硝酸纤维素膜上含有吗啡、氯胺酮抗原和一种羊抗鼠多克隆抗体。与显色孔对应的硝酸纤维素膜上用点膜机分别划定两条检测线和一条质控线，其中一条检测线为氯胺酮完全抗原，另一条检测线为吗啡完全抗原；质控线为纯化后的羊抗鼠IgG 多抗。

所述的玻璃纤维素膜上包被的胶体金标记鼠抗氯胺酮单克隆抗体由如下方法制成：

1、氯胺酮结合抗原制备：用重氮化法将半抗原氯胺酮偶联于载体蛋白BSA,形成偶联抗原。制备过程如下, 取5毫克氯胺酮溶于0.1摩尔/升 HCl ,并预冷至0～5℃,加入10毫克NaNO₂,4℃搅拌6小时。然后加入20毫克BSA(预先溶于0.1摩尔/升 磷酸盐缓冲液,pH8.6),4℃继续搅拌6小时。用葡聚糖凝胶SephadexG-25凝胶过滤纯化偶联物,纯化后冻干存于4℃备用。

2、小鼠免疫：以BSA偶联氯胺酮免疫8 周龄BALB/C小鼠15 只,免疫剂量50微克/只,皮下分点注射。共免疫3 次,每次免疫间隔3周。最后1次免疫10天后,断尾采血分离血清,用间接ELISA 法检测血清抗体效价。若效价>10^-4即可用于细胞融合。

3、脾细胞的制备：末次免疫后3天摘眼球取血分离血清，并同时处死，浸泡碘酒5分钟，无菌解剖取脾，用RPMI1640培养液洗二次后，研磨通过100目不锈钢网，获得游离细胞，再用氯化铵法溶解祛除红细胞，然后计数脾细胞并用10％FBS-RPMI 1640培养液配制成2X10⁸个/毫升浓度用于细胞融合。

4、SP2/0细胞的培养与细胞融合：复苏SP2/0细胞，于10％FBS-RPMI1640培养液中培养至对数生长期后配成4 X10⁷个/ml细胞浓度；分别取配制的上述浓度的脾细胞和SP2/0细胞各1毫升混合，使其比例为5：1；然后加入50%PEG 1毫升，于37℃，5%CO2孵箱内培养进行细胞融合。

5、融合细胞的培养及阳性杂交瘤的筛选与克隆：融合后的细胞置37℃,5%CO₂培养箱中以HAT、HT 培养基选择培养。用间接ELISA法以BSA偶联氯胺酮微克/毫升包被酶标板进行阳性筛选。对强阳性、细胞生长旺盛的孔进行3次有限稀释克隆化。

6、抗氯胺酮单克隆抗体的测定与制备：给腹腔注射液体石蜡10天后的小鼠腹腔注射克隆化细胞株10⁷个细胞,7天后抽取腹水,以硫酸钠盐析法提纯抗体,测其ELISA效价。以检测样品于492纳米波长测得吸光值与阴性对照的比值≥2.1定为阳性，出现阳性结果的最大稀释倍数为抗氯胺酮单克隆抗体的效价。测定后结果作为使用时稀释倍数的依据。