[发明专利]与小麦白粉病抗性基因PmHNK54连锁的标记引物及其应用无效

专利信息
申请号: 201010572276.9 申请日: 2010-12-03
公开(公告)号: CN101988064A 公开(公告)日: 2011-03-23
发明(设计)人: 许为钢;李春鑫;胡琳;张磊;王会伟;董海滨;张建周 申请(专利权)人: 河南省农业科学院
主分类号: C12N15/11 分类号: C12N15/11;C12Q1/68
代理公司: 郑州大通专利商标代理有限公司 41111 代理人: 张爱军
地址: 450002 *** 国省代码: 河南;41
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要:
搜索关键词: 小麦 白粉病 抗性 基因 pmhnk54 连锁 标记 引物 及其 应用
【说明书】:

技术领域

发明涉及小麦抗白粉病基因的标记引物,属分子遗传学领域,特别是涉及与小麦白粉病抗病基因PmHNK54紧密连锁的标记引物及其在分子标记辅助育种中的应用。

背景技术:

小麦白粉病是由小麦白粉病菌[ Blumeria graminis (DC) Speer f. sp. Tritici,简称为Bgt]所引起的一种气传性真菌病害,为世界各主要麦区的主要病害之一,且发病范围日益扩大,危害程度不断加重,可引起 13.4%~34% 的产量损失。选育和使用高效抗病品种是最经济、安全、有效的解决办法,根据“基因对基因”假说,任何抗病基因都会出现克服其抗性的毒性小种,反之亦然,二者呈共进化的关系,即一个新的抗病基因在经过一段时间的应用后,就会有针对它的毒性小种出现,使其逐渐丧失抗病性,给小麦生产造成严重损失。因此,发掘新的白粉病抗源已成为目前小麦抗白粉病育种工作一项非常迫切的任务。

到目前为止,国际小麦基因命名委员会共正式命名了来自43个位点的 61个白粉病抗病基因(powdery mildew, Pm)(Pm1-Pm43),其中35个抗病基因已找到连锁或共分离的分子标记。近年来,分子标记作图技术发展迅速,众多的分子标记类型中以简单重复序列标记(SSR)、扩增长度多态性标记(AFLP)以及由限制性片段长度多态性标记(RFLP)转化的序列标签位点(STS)标记应用最为广泛。新发掘的白粉病抗病基因所构建的遗传图谱基本都是应用的这三类标记。

随着小麦基因组学研究的蓬勃发展,表达序列标签(EST)数据库的信息量呈现出指数级增长,截止 2008年11月小麦 EST 数据库登录的 EST 序列  (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/dbEST/index.html)已超过 1,250,932条,同时EST-SSR 因具有成本低、特异性好等优点,为新的标记开发提供了丰富的序列资源,已成为SSR标记发展的一个新方向。

小麦近缘种属如一粒小麦、二粒小麦、粗山羊草等已成为白粉病新抗病基因非常重要的来源(Pm30-Pm37, Pm41-Pm43),这些抗病基因多为质量抗性,对当前流行的生理小种有较好的抗性。但这类抗源往往与不利的农艺性状相连锁,作为抗源导入栽培品种时,后代需要经过多代回交打破与不利基因的连锁,有的甚至经过多代回交以后仍无法打破这种连锁,这在很大程度上制约了此类抗源在育种中的应用。

发明内容:

本发明要解决的技术问题:提供一种与小麦白粉病抗性基因PmHNK54紧密连锁的标记及其应用,通过发掘到的分子标记,首次对小麦亲本材料郑 9754中的白粉病抗性新基因进行染色体定位,同时构建其连锁图谱,为该基因在小麦白粉抗病育种中的应用提供抗源材料和理论支持。

本发明的技术方案:

与小麦白粉病抗性基因PmHNK54连锁的标记引物,所述标记引物的核苷酸序列为:

标记引物Xbarc5,

P1:5’-GCGCCTGGACCGGTTTTCTATTTT-3’,

P2:5’-GCGTTGGGAATTCCTGAACATTTT -3’,

或者标记引物Xgwm312,

P3:5’-ATCGCATGATGCACGTAGAG -3’,

P4:5’-ACATGCATGCCTACCTAATGG -3’。

所述标记引物在遗传图谱上的顺序为Xbarc5、PmHNK54、 Xgwm312,所述标记引物Xbarc5与基因PmHNK54的遗传距离为5.0cM,所述标记引物Xgwm312与PmHNK54的遗传距离为6.0 cM。

将标记引物用于SSR标记筛选时的反应程序为:

(1) PCR反应: 

所述PCR反应体系为10μl,含10×buffer 1μl,10 mM/μl dNTP 0.2μL,20 uM/μL 引物 0.2μl,5 U/ul Taq 酶 0.1ul,去离子水 8.1 μl,20 ng/μl 基因组DNA 0.4 μl;

 (2) 扩增程序为:94℃ 预变性 3 min,94℃变性1 min,55℃或60℃复性1 min,72℃延伸 2 min, 40个循环;72℃延伸10 min;

下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于河南省农业科学院,未经河南省农业科学院许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201010572276.9/2.html,转载请声明来源钻瓜专利网。

×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top