[发明专利]一种烟草多酚氧化酶的分离技术

说明书

技术领域

本发明涉及一种烟草，具体涉及一种烟草多酚氧化酶的分离技术，属化工技术领域。

背景技术

多酚氧化酶是植物中广泛存在的一类铜蛋白物质，通过分子氧催化酚类物质氧化到醌，随后发生醌的聚合而褐色化。在不同的植物中都有几种不同的多酚氧化酶。由于多酚氧化酶的主要作用是酶棕色化反应而导致水果、蔬菜的变味及营养物质的流失。多酚氧化酶不但在烟草的成长过程中担任重要作用，而且影响着烟叶的颜色和香味。由于多酚氧化酶潜在的应用背景及对食物的保鲜作用，近年来，对于从烟草中提取多酚氧化酶，正处于研制阶段。

发明内容

本发明的目的是为克服上述现有技术的不足之处，提供一种烟草多酚氧化酶的分离技术，该技术采用新鲜烟叶切碎、匀浆、冷冻，通过粗酶液的提取，经超声波处理，离心提取上清夜进行层析分离，浓缩后得成品。

本发明是以如下技术方案实现的：一种烟草多酚氧化酶的分离技术，其特征是：该技术包括如下步骤：

(1)粗酶液的提取，将新鲜烟叶切碎，在4℃条件下匀浆，加入冷丙酮和水，在-18℃条件下保存24h；

(2)将步骤(1)经4层纱布过滤，用150ml冷丙酮洗涤3次，室温下干燥2h后冷冻备用；

(3)在上述丙酮干粉中加入200ml的磷酸缓冲液，PH值为6.5，超声波处理1h，离心，上清液中加入30％摩尔浓度的硫酸铵，4℃条件下搅拌4h后离心，取上清液，取80％摩尔浓度的硫酸铵，4℃条件下搅拌24h后离心；

(4)将上述溶液进行层析分离，其中多酚氧化酶经透析袋脱盐浓缩后，在-18℃条件下保存备用。

本发明的优点是：该技术采用新鲜烟叶切碎、匀浆、冷冻，通过粗酶液的提取，经超声波处理，离心提取上清夜进行层析分离，浓缩后得成品。该分离技术，工艺简单，流程合理，所得多酚氧化酶可广泛用于医药、食品及相关领域。

具体实施方式

实施例、

一种烟草多酚氧化酶的分离技术，其特征是：该技术包括如下步骤：

(1)粗酶液的提取，将新鲜烟叶切碎，在4℃条件下匀浆，加入冷丙酮和水，在-18℃条件下保存24h；

(2)将步骤(1)经4层纱布过滤，用150ml冷丙酮洗涤3次，室温下干燥2h后冷冻备用；

(3)在上述丙酮干粉中加入200ml的磷酸缓冲液，PH值为6.5，超声波处理1h，离心，上清液中加入30％摩尔浓度的硫酸铵，4℃条件下搅拌4h后离心，取上清液，取80％摩尔浓度的硫酸铵，4℃条件下搅拌24h后离心；

(4)将上述溶液进行层析分离，其中多酚氧化酶经透析袋脱盐浓缩后，在-18℃条件下保存备用。