[发明专利]辅助鉴定绿壳蛋鸡的专用引物及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种辅助鉴定绿壳蛋鸡的专用引物及其应用。

背景技术

绿壳蛋鸡是我国的优良蛋鸡之一，所产的绿壳蛋因为其独特的蛋壳颜色和优秀的蛋品质被国内外专家高度重视和关注，并吸引消费者争相购买。我国现有的绿壳蛋鸡纯系是由一些地方品种选育而来的，由于群体来源广泛而且选育时间短，所以相对于经高度选育的白来航等品系，绿壳蛋鸡品系纯合度并不高。按照常规育种方法，提高绿壳纯度的选育就是在纯系留种时淘汰产生粉壳后代的种鸡以及杂交测定以选出杂合子，理论上一次测定就可以分出不同基因型。但是由于受到公鸡产蛋表型无法直接测定以及留种后代数有限等条件的约束，需要多代连续选育才能达到育种目标。

Bartlett et al.(Bartlett J R，Jones C P and Smith E J.Linkage analysis of endogenous viral elementl，blue eggshell，and pea comb loci in chickens(J).The Journal of Heredity，1996，87(1)：67-70)将鸡的绿壳基因(O)定位在1号染色体短臂上，它与内源病毒因子(ev1)及豆冠位点(P)连锁。杨宁等(杨宁，赵瑞，李显耀，徐桂云，杨长锁，严华祥.鸡绿壳蛋基因分子标记的研究.家禽研究最新进展——第十一次全国家禽学术讨论会论文集，2003.37-39)通过杂交试验发现中国东乡绿壳蛋鸡的绿壳性状也是由单基因控制的显性性状。东乡绿壳蛋鸡均携带绿壳基因，可分为纯合型(OO)和杂合型(Oo)。纯合型东乡绿壳蛋鸡与非绿壳蛋鸡(如白来航蛋鸡)杂交，F1代均产绿壳蛋。杂合型东乡绿壳蛋鸡与非绿壳蛋鸡(如白来航蛋鸡)杂交，F1代中，部分产绿壳蛋，部分产粉壳蛋。

绿壳蛋鸡产蛋量少，纯系产蛋期平均产蛋160个左右，所以一般用白来航鸡与之进行级进杂交，以提高产蛋量。杂交后代一般都出现分离现象，大部分产绿壳蛋，还有一部分产粉壳蛋。可能由于绿壳蛋鸡来源于地方品种，我国地方品种中很大一部分是褐壳蛋品种，所以绿壳蛋鸡中也有可能混有褐壳蛋的遗传因子，而褐壳蛋鸡和白壳蛋鸡(很大一部分是白来航)杂交后代产粉壳蛋，所以绿壳蛋鸡与白来航杂交后代会有粉壳蛋的出现(赵瑞，刘珍珍，徐桂云，杨宁.利用PCR-SSCP分析鸡绿壳蛋基因的SNP标记.农业生物技术学报.2006，14(5)：673-676)。

研究绿壳基因的遗传规律，提高绿壳蛋鸡品系的纯合度是很有必要的。利用分子标记辅助选择进行分子育种不但可以进行直接选择，还可以在早期选择，大大加快遗传进展。

发明内容

本发明的目的是提供辅助鉴定绿壳蛋鸡的专用引物及其应用。

本发明提供的专用引物为序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA组成的引物对。

所述引物对可用于辅助鉴定绿壳蛋鸡，也可进一步用于辅助鉴定绿壳蛋鸡纯系。

本发明还保护一种辅助鉴定绿壳蛋鸡的方法，包括如下步骤：以待测鸡的基因组DNA为模板，用所述引物对进行PCR扩增，用限制性内切酶MscI酶切PCR扩增产物；如果PCR扩增产物只有一种，且不能被限制性内切酶MscI酶切，待测鸡为候选的绿壳蛋鸡；如果PCR扩增产物有两种，且其中一种不能被限制性内切酶MscI酶切，另一种能被限制性内切酶MscI酶切，待测鸡为候选的绿壳蛋鸡；如果PCR扩增产物只有一种，且能被限制性内切酶MscI酶切，待测鸡为候选的非绿壳蛋鸡。

本发明还保护一种辅助鉴定绿壳蛋鸡纯系的方法，包括如下步骤：以待测鸡的基因组DNA为模板，用所述引物对进行PCR扩增，用限制性内切酶MscI酶切PCR扩增产物；如果PCR扩增产物只有一种，且不能被限制性内切酶MscI酶切，待测鸡为候选的绿壳蛋鸡纯系；如果PCR扩增产物有两种，且其中一种不能被限制性内切酶MscI酶切，另一种能被限制性内切酶MscI酶切，待测鸡为候选的绿壳蛋鸡杂合体；如果PCR扩增产物只有一种，且能被限制性内切酶MscI酶切，待测鸡为候选的非绿壳蛋鸡。

限制性内切酶MscI的酶切序列(其中的箭头所指位置为酶切位点)：

5’-TGG↓CCA-3’

3’-ACC↑GGT-5’。

所述待测鸡可为白来航蛋鸡或东乡绿壳蛋鸡。