[发明专利]辅助鉴定绿壳蛋鸡的专用引物及其应用

权利要求书

1.序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA组成的引物对。

2.权利要求1所述引物对在辅助鉴定绿壳蛋鸡中的应用。

3.权利要求1所述引物对在辅助鉴定绿壳蛋鸡纯系中的应用。

4.一种辅助鉴定绿壳蛋鸡的方法，包括如下步骤：以待测鸡的基因组DNA为模板，用权利要求1所述引物对进行PCR扩增，用限制性内切酶MscI酶切PCR扩增产物；如果PCR扩增产物只有一种，且不能被限制性内切酶MscI酶切，待测鸡为候选的绿壳蛋鸡；如果PCR扩增产物有两种，且其中一种不能被限制性内切酶MscI酶切，另一种能被限制性内切酶MscI酶切，待测鸡为候选的绿壳蛋鸡；如果PCR扩增产物只有一种，且能被限制性内切酶MscI酶切，待测鸡为候选的非绿壳蛋鸡。

5.一种辅助鉴定绿壳蛋鸡纯系的方法，包括如下步骤：以待测鸡的基因组DNA为模板，用权利要求1所述引物对进行PCR扩增，用限制性内切酶MscI酶切PCR扩增产物；如果PCR扩增产物只有一种，且不能被限制性内切酶MscI酶切，待测鸡为候选的绿壳蛋鸡纯系；如果PCR扩增产物有两种，且其中一种不能被限制性内切酶MscI酶切，另一种能被限制性内切酶MscI酶切，待测鸡为候选的绿壳蛋鸡杂合体；如果PCR扩增产物只有一种，且能被限制性内切酶MscI酶切，待测鸡为候选的非绿壳蛋鸡。

6.如权利要求4或5所述的方法，其特征在于：所述待测鸡为白来航蛋鸡或东乡绿壳蛋鸡。

7.如权利要求4至6中任一所述的方法，其特征在于：所述PCR扩增的反应体系为：基因组DNA 50-100ng，含Mg²⁺的10×PCR扩增缓冲液1.5μl，4mmol/L的dNTPs混合液0.8μl，10μmol/L的序列表的序列1所示DNA 0.3μl，10μmol/L的序列表的序列2所示DNA 0.3μl，Taq DNA聚合酶0.5U，补充ddH₂O至15μl；所述PCR扩增的反应条件为：95℃变性5min；95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，共30个循环；72℃延伸10min；所述酶切的反应体系为：PCR扩增产物3.5μl，10×酶切缓冲液1μl，限制性内切酶MscI 4U，补充ddH₂O至10μl；所述酶切的反应条件为：37℃2-4个小时。

8.权利要求1所述引物对在制备如下(A)或(B)的试剂盒中的应用：

(A)辅助鉴定鉴定绿壳蛋鸡的试剂盒；

(B)辅助鉴定绿壳蛋鸡纯系的试剂盒。

9.含有权利要求1所述引物对的如下(A)或(B)的试剂盒：

(A)辅助鉴定鉴定绿壳蛋鸡的试剂盒；

(B)辅助鉴定绿壳蛋鸡纯系的试剂盒。

10.权利要求1所述引物对在鸡的育种中的应用，是用候选的绿壳蛋鸡纯系进行育种；所述候选的绿壳蛋鸡纯系是采用权利要求5或6所述方法鉴定得到的。