[发明专利]人绒毛膜促性腺激素的纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种激素类药物的纯化方法，具体涉及一种人绒毛膜促性腺激素的纯化方法。

背景技术

人绒毛膜促性腺激素(HCG)是由胎盘的滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，能够维持月经黄体的寿命，使月经黄体增大成为妊娠黄体；它还能促进雄激素被芳香化从而转化为雌激素，同时刺激孕酮形成；抑制植物凝集素对淋巴细胞的刺激作用，避免胚胎滋养层细胞被母体淋巴细胞攻击；刺激胎儿睾丸分泌睾酮，促进男性性分化；与母体甲状腺细胞TSH受体结合，刺激甲状腺活性。在临床上，人绒毛膜促性腺激素被用于女性无排卵或卵泡成熟障碍引起的不育症，也是辅助生育技术控制性超量刺激方案的一部分。它还被用于治疗男性低促性腺激素性性功能低下，精子生成不足引起的不育以及促性腺垂体功能不足引起的青春期延迟和隐睾。

目前，人绒毛膜促性腺激素的生产工艺还普遍存在着收率不高的缺陷，制得的产品纯度也有待于进一步提高。

发明内容

因此，本发明的目的是提供一种人绒毛膜促性腺激素的纯化方法，相比已有生产工艺，该纯化方法获得人绒毛膜促性腺激素纯度和收率更高，更有利于该药物的临床应用和运输、保存。

本发明提供的人绒毛膜促性腺激素的纯化方法包括以下步骤：

(1)将人绒毛膜促性腺激素粗品溶解于pH值为4～5的0.05mol/L醋酸钠缓冲液后，加到载体为琼脂糖、葡聚糖凝胶或羟磷酸钙的羧甲基阳离子交换层析柱上，以pH值为4～5的包含0.05mol/L醋酸钠和0.2～0.5mol/L氯化钠的缓冲液洗脱，收集270～290nm，优选为280nm下光密度为0.6～0.7的洗脱液；

(2)将洗脱液进行脱盐浓缩；

(3)再加到载体为琼脂糖、葡聚糖凝胶或羟磷酸钙的羧甲基阳离子交换层析柱上，以pH值为5.5～6.5的0.05～0.1mol/L醋酸钠缓冲液洗脱，收集270～290nm，优选为280nm下光密度为0.6～0.7的洗脱液；

在上述纯化方法中，HCG在280nm处有最大吸收。

在步骤(1)中，优选地，以pH值为4～5的包含0.05mol/L醋酸钠和0.2～0.5mol/L氯化钠的缓冲液洗脱之前以pH值为4～5的0.05mol/L醋酸钠缓冲液进行洗涤。

在步骤(2)中，脱盐浓缩可以利用超滤膜，优选为截留分子量为1万的超滤膜进行。优选地，洗脱液被脱盐浓缩至其电导率与pH值为4～5的0.05mol/L醋酸钠缓冲液的电导率相等时为止。

在步骤(3)中，优选地，在被加到羧甲基阳离子交换层析柱前，先将脱盐浓缩的洗脱液的pH值和电导率调节至与pH值为5.5～6.5的0.05～0.1mol/L醋酸钠缓冲液的pH值和电导率相等。

优选地，步骤(1)、(2)和/或(3)在0～15℃下进行。

进一步优选地，上述纯化方法还包括向步骤(3)获得的洗脱液中加入乙醇进行沉淀。更优选地，上述纯化方法还包括将沉淀进行脱水和真空干燥，例如脱水采用无水乙醇进行；真空干燥为在五氧化二磷存在下的真空干燥。

上述纯化方法还包括采用磷酸钙除去纯化的人绒毛膜促性腺激素中的热原。

本发明成功地将两个阳离子交换树脂以串联的方式应用于人绒毛膜促性腺激素(HCG)的纯化中，该纯化方法制得HCG效价不低于7000iu/mg的HCG产品，总收率超过90％。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1为通过本发明的纯化方法与现有工艺制备的HCG产品的电泳图谱，从左至右分别为分子量标准品(Marker)、现有工艺1制备的产品、现有工艺2制备的产品、本发明的纯化方法制备的产品。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。

实施例1

起始原料采用单位效价不低于120iu/mg的HCG粗品，该粗品是由孕妇尿液通过苯甲酸钠吸附、高盐抽提以及低盐反抽等方法制得的。

纯化工艺：

2.1层析1(层析环境为0～15℃)：

2.1.1将500g的HCG粗品用0～15℃、pH值为4～5的0.05mol/L醋酸钠缓冲液(平衡液1)溶解，共需40L。

2.1.2选用20L CM-葡聚糖凝胶层析柱(Sephadex LH-20，美国GE公司)，事先用平衡液1平衡至其流出液的电导和pH值与平衡液1的基本一致。