[发明专利]一种检测伏马菌素的化学发光试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明公开一种伏马菌素的化学发光酶联免疫检测试剂盒，本发明还提供了该试剂盒的制备方法，属于免疫检测领域。

背景技术

伏马菌素（Fumonisins）是20世纪80年代末期发现的一类主要由串珠镰刀菌（Fusarium Moniliforme）产生的真菌毒素，到目前为止，已经发现包括伏马菌素有伏马菌素B1（FB1）、伏马菌素B2（FB2）和伏马菌素B3（FB3）等在内的11种，其中FB1是污染玉米或串珠镰刀菌培养物中伏马菌素的主要组分，也是导致伏马菌素毒性作用的主要原因。FB1相对分子质量为721.83。在众多的真菌毒素中，伏马菌素被认为是对人、畜健康威胁较严重的真菌毒素之一，它广泛存在于世界范围的玉米及其制品中，与人类食管癌的高发率有关，可引起马脑白质软化症(ELEM)，猪肺水肿症候群(PPE)、并具有致癌活性。许多动物实验证明，它可引起实验动物的肝、肾损伤。因此其在食品卫生领域中越来越受到人们的重视，是一种具有重大卫生学意义的真菌毒素，已被国际癌症研究中心（IARC）列入人类可能的致癌物名单。自伏马菌素被发现后，立刻引起世界各国的广泛重视，相继建立了各种检测方法，对伏马菌素在食品中的污染状况进行了广泛的调查，一些国家相继制定了伏马菌素在食品及饲料中的限量标准。目前我国尚未建立伏马菌素的限量标准。

检测伏马菌素的方法主要包括薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)和毛细管电泳法(Capillary Electrophoresis)、气/质联用法(GC/MS)、液体二次离子探针质谱法(Liquid- SMS)、放射免疫检测技术(RIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等。HPLC法和毛细管电泳法等仪器分析方法具有较高的灵敏度和特异性，但是需要复杂的提取净化步骤和较贵重的仪器，不易推广使用。ELISA方法虽具有简单、快速、灵敏的特点，也适宜大规模的筛查工作，但其灵敏度有一定的制约。本发明提供的伏马菌素化学发光酶联免疫检测试剂盒，通过检测发光底物产生的光信号代替ELISA方法中的显色底物，提高了检测的灵敏度，具有特异，快速，可靠的特点。

发明内容

本发明提供了一种伏马菌素的化学发光酶联免疫检测试剂盒，具有灵敏度高，特异性强，操作简单方便等特点，可用于谷物等粮食及其制品中伏马菌素的检测。

本发明还提供了上述试剂盒的制备方法。

本发明主要是利用抗原与抗体的特异性免疫反应的基本原理，在间接竞争ELISA的基础上，将免疫分析法与化学发光法相结合而实现的。

本发明检测伏马菌素的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括已包被的发光板、标准品、酶标羊抗小鼠IgG、伏马菌素单克隆抗体、化学发光底物液、稀释液、10倍浓缩的洗涤液。

其中：

所述发光板为96孔可拆不透明白色发光板，已包被有伏马菌素与卵清蛋白偶联物制成的包被抗原，其包被浓度为0.25mg/L。

所述伏马菌素系列标准溶液浓度分别是0、0.1、0.5、2.5、12.25、61.25μg/L。

所述酶标羊抗小鼠IgG为商品化原液，其工作浓度为1：5000。

所述伏马菌素单克隆抗体是由伏马菌素FB1与血蓝蛋白偶联物免疫Balb/C小鼠获得的单克隆抗体，该抗体与伏马菌素FB2、FB3的交叉反应率398%和56%。其工作浓度为1：20000。

所述发光液是增强型鲁米诺化学发光底物液，分试剂A（含有发光增强剂的鲁米诺化学发光底物溶液）和B（过氧化氢溶液），临用时1：1混合。

所述稀释液为含有0.5%BSA的磷酸盐缓冲液（0.01M，pH7.4）。

所述10倍浓缩的洗涤液为0. 1M的磷酸盐缓冲液（含有0.5% 吐温-20）。

本发明试剂盒最大检测范围为0.1～61.25 μg/L。

试剂盒中涉及的试剂主要成份及配制方法如下：

1．稀释液：0.5%BSA-PBS

                                                 

 2.10倍浓缩洗涤液           

 

 3. 化学发光底物

A液：   

 

 B液：0.3%的H₂O₂

使用时A液与B液按体积比1：1混合。