[发明专利]一种检测伏马菌素的化学发光试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种检测伏马菌素的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括已包被的发光板、标准品、酶标羊抗小鼠IgG、伏马菌素单克隆抗体、化学发光底物液、稀释液、10倍浓缩的洗涤液：

其中，发光板为吸附有伏马菌素与卵清蛋白（OVA）偶联物的可拆96孔不透明白色发光板，偶联物包被浓度为0.25mg/L；

标准品浓度为0、0.1、0.5、2.5、12.25、61.25ug/L的甲醇：PBS（7：93，v/v）：

化学发光底物液为鲁米诺和过氧化氢溶液两部分按1：1混合：

稀释液为含有0.5%BSA的磷酸盐缓冲液（0.01M，pH7.4）：

10倍浓缩的洗涤液为0. 1M的磷酸盐缓冲液（含有0.5% 吐温-20）。

2.根据权利要求1所述试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

1）抗原的制备

采用戊二醛法将伏马菌素分别与血蓝蛋白（KLH）和卵清蛋白（OVA）偶联制备免疫抗原和包被抗原；

2）单克隆抗体的制备

取Balb/c小鼠，采用足垫免疫并取腘淋巴结，常规融合法制备单克隆抗体；

3）化学发光酶免疫检测方法的建立

将包被抗原用包被液稀释并纵向包被发光板，用洗液洗涤拍干；加入稀释的伏马菌素单克隆抗体，洗板；加入1：5000稀释的酶标羊抗小鼠IgG，洗板；加入现配的发光底物溶液，100μL/孔，测定发光值；以发光值随包被抗原浓度有明显梯度变化的包被抗原浓度和抗体稀释度为最佳浓度进行特异性测定；

4）试剂盒的组装

包被有包被抗原的发光板：发光板为96孔可拆不透明白色发光板，已包被有伏马菌素与卵清蛋白偶联物制成的包被抗原，其包被浓度为0.25mg/L；

伏马菌素系列标准溶液；

酶标羊抗小鼠IgG：

伏马菌素单克隆抗体：发光液：增强型鲁米诺化学发光底物液，试剂A（含有发光增强剂的鲁米诺化学发光底物溶液）和B（过氧化氢溶液）单独分装，临用时1：1混合；

稀释液：0.01M的磷酸盐缓冲液（含有0.5%BSA，pH7.4）；

洗涤液：0. 1M的磷酸盐缓冲液（为10倍浓缩液，含有0.5% 吐温-20）；

发光板：取96孔不透明白色发光板，将包被抗原用包被液稀释至0.25mg/L，每孔内加入100μL，4℃ 24h，用洗液洗涤3次，250μL/孔，3min/次，在吸水纸上拍干；用铝箔袋真空密封保存。