[发明专利]一种烟叶烘烤用微生物制剂生产工艺

权利要求书

1.一种烟叶烘烤用微生物制剂生产工艺，其特征在于先直接用重量百分比W/W为10％±5％纯烟叶浸提的固体培养基，在50℃-60℃培养温度下，分离筛选得到烟叶中本身自带的、具有活性的高温菌株——YN113、YN105、YN104、YN91，YN114菌株，然后再使用菌该菌生产微生物制剂，具体步骤是：

A、将充分浸泡3-5天废弃烟叶液作为烟叶浸提原液，以体积比计，烟叶浸提原液/自来水按5％-15％的量(V/V)与琼脂(2.5g/100mL)混合，不另添加任何附加成分和调节pH值，在0.11-0.13MPa下25-35分钟高压灭菌后，倒双层平皿，制得纯烟叶浸提液固体平板；

按常规将烟叶样品梯度稀释后，取0.2mL放入纯烟叶浸提液固体平板中，涂布均匀后置50℃-60℃恒温箱培养至菌落出现，分离后得到在高温50℃-60℃还具有生理活性的烟叶表面微生物菌株，制剂生产工艺的菌种；

B、采用上述A步骤分离出的高温芽孢杆菌菌种，按体积比例，用3-5％的接种量接种于在含8±5％(重量/体积)经粉碎处理的废弃烟叶和92±95％自来水，经121-126℃、0.11-0.13MPa下灭菌25-35分钟的发酵培养基中，搅拌速度120-130rpm，维持培养温度在45-55℃，发酵时间40-48h；在发酵结束前2h，按发酵液重量百分比比例，加入0.1％过滤除菌的硫酸锰，继续搅拌至发酵结束；发酵液放罐直接分装容器，密封；即为提供烟叶烘烤用的微生物制剂。

2.根据权利要求1所述的烟叶烘烤用微生物制剂生产工艺，其特征在于所述工艺生产菌种是分离的高温菌菌种，其接种量为3-5％。

3.根据权利要求1、2、3所述的烟叶烘烤用微生物制剂生产工艺，其特征在于培养基成分为8±5％经粉碎处理的废弃烟叶和92±95％的自来水，不调节pH值。

4.根据权利要求1、2、3、4所述的烟叶烘烤用微生物制剂生产工艺，其特征在于发酵结束前2-4h，加入0.1-0.5％经过滤除菌的硫酸锰，继续搅拌至发酵结束，发酵液放罐时直接分装入容器，密封保存。

5.根据权利要求1或2所述的纯烟叶浸提液固体平板高温分离烟叶表面微生物的方法，其特征在于产淀粉酶菌株YN91的优化培养基为：小麦麸皮1.5％，尿素0.5％，NaCl 0.5％，工艺参数为发酵温度50℃，时间18h，搅拌速度125rpm。

6.根据权利要求1或2所述的纯烟叶浸提液固体平板高温分离烟叶表面微生物的方法，其特征在于产蛋白酶菌株YN114的优化培养基为：可溶性淀粉0.5％，牛肉膏1.0％，CaCO₃0.3％，工艺参数为发酵温度43℃，时间36h，搅拌速度125rpm。

7.根据权利要求1所述的烟叶烘烤用微生物制剂生产工艺，其特征在于发酵液即为提供烟叶烘烤用改善烟叶工业可用性品质的微生物制剂。

8.根据权利要求1所述的烟叶烘烤用微生物制剂生产工艺，其特征在于使用烟叶烘烤用微生物制剂成品时，用清水稀释1倍后喷施，不同生产菌株生产的菌剂可按等体积混合后加水使用，喷施用量：10000mL/亩。