[发明专利]一种鉴别建鲤的分子标记方法

权利要求书

1.一种鉴别建鲤的分子标记方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）选择建鲤自交F1代、黄河鲤父本和建鲤母本的杂交F1代混合群体为研究对象，随机选择48尾，分别采样血液，采用DNA提取法分别提取DNA样本；

2）采用IGF2a基因内含子2进行PCR扩增，模板为通过步骤1）所提取的混合群体的DNA样本；

3）通过步骤2）扩增出的PCR产物经电泳检测为693bp后，进行测序，获得所扩增的核苷酸序列；

4）通过步骤3）获得核苷酸序列以后，根据给定对照的野生型碱基C和突变型碱基CA的结果进行序列比对，并判断比对结果：

（a）获得的核苷酸序列为野生型碱基C，则获得的核苷酸为来自建鲤的概率为67.6%；

（b）获得的核苷酸序列为突变型碱基CA，则获得的核苷酸为来自正交个体的概率为100%。

2.根据权利要求1所述的鉴别建鲤的分子标记方法，其特征在于，在步骤2）中：在进行PCR扩增时，PCR反应体系为25uL，包括10×buffer 15uL，Mg2+（25m mol/L） 1uL，dNTPs （各 2mmol/L）1uL，上下游引物（10 mmol/L）各1uL模板DNA 1uL，TaqDNA聚合酶（Promega）1U，dd H₂O扩增反应均在PCR仪上完成。

3.根据权利要求1所述的鉴别建鲤的分子标记方法，其特征在于，在步骤2）中，PCR 反应条件如下：

（1）94℃预变性3 min；

（2）94℃变性20s；

（3）退火温度56度20s；

（4）72℃延伸30s；

（5）步骤（2）-（4）重复33次；

（6）72 ℃延伸10min ；

（7）将经过步骤（6）反应后的 PCR 产物用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结合goldview显色进行检测。