[发明专利]一种多肽免疫试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种多肽免疫试剂盒及其检测方法。

背景技术

随着肝癌外科的成熟和发展，肝癌的治疗方法和手段日渐丰富，而不再局限于单一的手术治疗。肝切除术和肝移植仍然是肝癌患者治疗的主要方法，但微创治疗、经皮肝动脉化疗栓塞等技术方法，作为手术治疗的重要补充，也得到了较广泛的应用，它们在为患者创造手术治疗机会、降低或减少肿瘤的复发和转移等方面都起到了一定的作用，延长了患者的生存时间。虽然如此，肝癌患者发病隐匿、无明显症状、多数患者就诊时已失去手术根治的机会。因此，“早期发现、早期诊断、早期治疗”是降低癌症死亡率的重要措施。筛选和建立用于癌症早期诊断的、高敏感、高特异的血清学诊断技术，提供癌症早期预警普查，具有重大意义和巨大市场前景。

目前国内外广泛采用检测血清中甲胎蛋白(AFP)来确诊肝癌(HCC)，尽管这种方法提高了HCC的检测水平，但仍有显著数量患者的甲胎蛋白并未升高，尤其对肿瘤直径小于3CM的小肝癌患者，其敏感性及特异性更低。近年来，标志物联检在肿瘤诊断中的应用的研究得到很大的重视。如通过联检甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、血清铁蛋白(SF)、α-L-岩藻糖苷酶(AFU)可显著提高肝癌诊断的阳性率。AFP、CEA、SF、CA等四标志物联检原发肝癌的实验也获得不错的结果。但由于诊断特异性或成本效益方面的原因，很难在肝癌普查中广泛应用。

血清中丰富的多肽资源在目前重大疾病诊断中扮演重要的角色。采用目前常规的临床手段进行多肽检测逐渐引起学术界和医药界的高度重视，基于多肽的肿瘤诊断技术正开始向临床应用高速发展，肿瘤的早期预警技术也在开发之中，一些多肽的联合应用有可能为肿瘤等重大疾病的预警提供革新性的突破。血清中多肽同血清中蛋白不同，其分子量低于10000Da，结构简单，变化多样。是否能够采用目前常规的临床手段进行检测仍在探索。

目前，检测血清中多肽进行临床诊断还没有先例。血清多肽能否用于诊断或早期诊断肝癌可以从三个方面来判断。1、血清多肽是血清蛋白的降解产物或基因直接编码产物。当生理状态发生变化时尤其向肿瘤转化时，蛋白的代谢发生变化，导致多肽相应变化，从而建立了多肽----疾病的相关关系，因此，多肽可以像蛋白一样进行疾病诊断。2、实践上已经有一些疾病的诊断采用多肽标志物，1985年以来，利用合成多肽检测艾滋病病毒(P24)、风疹病毒、人巨细胞病毒及类风湿等已应用到临床。3、文献表明，多肽可以用于临床诊断，如，Clinical Chemistry 51：10，1933-1945(2005)和Clinical Chemistry 53：61，067-1074(2007)认为血清多肽标志物能更精确的区分蛋白标志物不能区分的肿瘤。Nat Methods.2008Jan；5(1)：57-9认为质谱诊断肿瘤甚至比MRI还好。质谱技术给生命科学带来的促进作用举世公认，近十年来，质谱在新生二筛查、基因突变检测方面取得一系列重要进展，并出现了单核苷酸多态性(SNP)分析专业质谱仪器，显示了质谱在临床诊断方面的价值。

基于血清多肽抗原的肿瘤早期诊断试剂盒是当前最受关注的肿瘤早期诊断技术之一。目前临床领域中单一标志物始终存在着特异性不强、阳性率较低等不足，特别是对早期肿瘤的检测率不高，多标志联合检测事在必行，但苦于没有一个很好的手段实现同时检测。2006年Josep Villanueva等人对32例前列腺癌、21例乳腺癌和20例膀胱癌血清多肽研究，发现14个、10个和58个可分别作为前列腺癌、乳腺癌和膀胱癌的肿瘤标志多肽，预测准确率为100％。血清中存在的丰富的多肽为肿瘤预警和早期诊断提供了丰富的标志物资源，这些多肽的联合应用有可能为肿瘤等重大疾病的预警提供革新性突破。

近几年兴起的血清多肽组学已成功应用于几种癌的诊断研究，如乳腺癌，卵巢癌，前列腺癌等，主要采用的是表面增强激光解吸离子化(SELDI)技术和免疫磁珠技术，但该体系存在价格昂贵，不利推广的缺点。但是，目前还没有见肝癌早期诊断用试剂盒，其主要原因是缺少合适的候选靶标和合适的检测方法，这需要强大的基础研究支持。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种用于检测多肽标志物抗原的多肽免疫检测试剂盒，包括血清多肽抗体和缓冲液，所述抗体固定在固相载体上，所述固相载体为包被蛋白G(Protein G)或蛋白A(Protein A)的琼脂糖颗粒。