[发明专利]哺乳动物细胞染色体中期相标本的制备方法无效
| 申请号： | 201010560342.0 | 申请日： | 2010-11-18 |
| 公开（公告）号： | CN102465168A | 公开（公告）日： | 2012-05-23 |
| 发明（设计）人： | 申秀萍;傅鹏;张建军;姜凌;王建君 | 申请（专利权）人： | 天津市新药安全评价研究中心;天津药物研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/02 | 分类号： | C12Q1/02 |
| 代理公司： | 北京泛华伟业知识产权代理有限公司 11280 | 代理人： | 郭广迅 |
| 地址： | 300193 *** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 哺乳动物 细胞 染色体 中期 标本 制备 方法 | ||
1.一种哺乳动物细胞染色体中期相标本的制备方法，该制备方法包括以下步骤：在20～30℃的温度和45～50％的相对湿度下将哺乳动物细胞悬浮液滴加到载玻片上。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在25℃的温度和50％的相对湿度下将哺乳动物细胞悬浮液滴加到载玻片上。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述哺乳动物细胞悬浮液滴加高度为距载玻片15～25cm，优选20cm。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述哺乳动物细胞悬浮液滴加时，载玻片与水平面成15°角。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述哺乳动物细胞悬浮液的滴加量为每载玻片10μL。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述哺乳动物细胞悬浮液的制备方法包括以下步骤：
(1)将培养至指数生长期的哺乳动物细胞用秋水仙素处理；
(2)以体积比为甲醇∶冰醋酸＝3∶1的固定液固定哺乳动物细胞。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述哺乳动物细胞悬浮液的制备方法包括以下步骤：
(1)将培养至指数生长期的哺乳动物细胞用0.25％W/V胰蛋白酶水溶液消化制得每毫升包含3～5×104个细胞的细胞悬浮液，并培养21小时；
(2)加秋水仙素处理24小时，秋水仙素的浓度为每毫升细胞悬浮液15μg；
(3)弃去培养基，用0.25％W/V胰蛋白酶水溶液消化哺乳动物细胞并离心，优选在1000rpm下离心10分钟；
(4)弃去上清，加入0.075mol/L的KCl水溶液37℃下静置20分钟；
(5)再加入体积比为甲醇∶冰醋酸＝3∶1的固定液，吹打细胞混匀后离心，优选在1000rpm下离心10分钟；
(6)弃去上清，再加入体积比为甲醇∶冰醋酸＝3∶1的固定液，37℃下静置20分钟后离心。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(6)反复进行3次。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述哺乳动物细胞悬浮液滴加到载玻片后自然干燥，再用10％V/V姬姆萨染液染色。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的制备方法制备的哺乳动物细胞染色体中期相标本。
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