[发明专利]一种超分辨荧光寿命成像方法及成像系统

权利要求书

1.一种超分辨荧光寿命成像方法，其特征在于，所述方法包括下述步骤：

对标记于样品中的光开关染料分子进行稀疏激活；

激发样品中被激活的光开关染料分子，收集被激发的光开关染料分子所发射的光子并记录光开关染料分子的荧光图像，对荧光图像中的光开关染料分子进行质心定位；

对在质心定位处接收到的光子进行计数，确定被激发的光开关染料分子的荧光寿命；

结合得到的光开关染料分子的质心定位结果和荧光寿命，构建超分辨荧光寿命图像。

2.如权利要求1所述的超分辨荧光寿命成像方法，其特征在于，所述对样品中的光开关染料分子进行稀疏激活的步骤通过对样品进行全场面照明实现。

3.一种用于实现如权利要求1所述的超分辨荧光寿命成像方法的成像系统，其特征在于，包括：

第一激光器，用于实现对标记于样品中的光开关染料分子的稀疏激活；

第二激光器，用于激发样品中被激活的光开关染料分子；

合束镜，用于将所述第一激光器所发出的光和所述第二激光器所发出的光合成为一束光；所述第一激光器所发出的光由所述合束镜的第一反射面呈一定入射角射入，并在第一反射面反射；所述第二激光器所发出的光由所述合束镜的第二反射面射入，经所述合束镜透射后由所述合束镜的第一反射面射出；

依次设于所述第一激光器和所述合束镜之间的第一透镜、第一滤光片、反射镜；

依次设于所述第二激光器和所述合束镜之间的第二透镜、第二滤光片、扫描振镜；

第一物镜、第二物镜；

依次设于所述合束镜的第一反射面与所述第一物镜的之间的第一管镜、双色镜；

时间相关单光子计数器，用于对接收到的光子进行计数；

依次设于所述双色镜与所述时间相关单光子计数器之间的第一发射滤光片、第二管镜、光电倍增管；

电子倍增型CCD摄相机，用于记录光开关染料分子的荧光图像；

设于所述第二物镜与所述电子倍增型CCD摄相机之间的第二发射滤光片、第三管镜；

主机，同时连接所述时间相关单光子计数器和所述电子倍增型CCD摄相机，用于结合所述电子倍增型CCD摄相机记录的光开关染料分子的荧光图像，对荧光图像中的光开关染料分子进行质心定位，并根据所述时间相关单光子计数器在质心定位处对接收到的光子进行计数的结果，构建超分辨荧光寿命图像；同时还连接所述第一激光器和所述第二激光器，用于控制所述第一激光器和所述第二激光器的工作；

以及

延迟器，连接于所述主机和所述电子倍增型CCD摄相机之间，用于实现所述第二激光器和所述电子倍增型CCD摄相机的同步。

4.如权利要求3所述的成像系统，其特征在于，还包括设于所述第一滤光片前侧或后侧的中性密度滤光片。

5.如权利要求3所述的成像系统，其特征在于，所述第一激光器为连续光激光器。