[发明专利]一种生物源杀菌剂香菇多糖的液态发酵生产及提取方法

说明书

技术领域：

一种生物源杀菌剂香菇多糖的液态发酵生产及提取方法，属于生物科技领域。通过香菇菌种的罐体有氧液态发酵，获取香菇菌丝体；通过超声波破壁碱提、超滤膜过滤、GPC制备柱分子筛选择，获得分子量5万-50万的活性多糖成分。以高含量香菇多糖活性成分制备香菇多糖水剂，可有效防治水稻、番茄、烟草病毒病，并可并能促进作物生长，提高作物抗性。

背景技术：

香菇多糖是由香菇子实体或菌丝体提取制得的生物源食品及药品，对植物有杀菌剂生长调节剂的作用。药效试验表明，香菇多糖可有效防治水稻、番茄、烟草病毒病，并可并能促进作物生长，提高作物抗性。报道中所用的香菇多糖，多经过香菇子实体提取制得。培养香菇子实体需要的时间较长，一般需要20天左右。

本发明人为了提高香菇多糖的产量，采用了罐体液态发酵法，培养香菇菌丝体，进而提取高含量香菇多糖活性成分，成功制备了生物源农药香菇多糖水剂。该发酵工艺，菌丝体产量高，条件易于控制。香菇多糖菌丝体经超微粉碎机粉碎、超声波破壁、碱液提取、超滤膜分离、GPC制备柱分子筛筛选，可制备出5万-50万分子量香菇多糖，该方法有效的提取了有杀菌作用的多糖分子，进而制备了高效环保型生物农药香菇多糖水剂。

发明内容：

采用罐体液态发酵法生产香菇多糖菌丝体，应用粮油加工企业下脚料豆粕、麸皮、玉米渣等浸出液作为培养基，实现了资源有效利用。菌丝培养过程中，我们对接种量、通气量、液态培养的酸碱度、温度等参数均进行了优化，每批菌丝的发酵培养时间为60小时，每2000升发酵罐可出产干菌丝体40公斤，与用固体培养基培养香菇子实体相比，缩短了培养时间，提高了香菇多糖的单位产量。菌丝体粗多糖含量可达5％以上，为提取高含量香菇多糖提供了保证。

香菇多糖菌丝体经超微粉碎机粉碎、超声波破壁、碱液提取、超滤膜分离、GPC制备柱分子筛筛选，可制备出5万-50万分子量香菇多糖，该方法有效的提取了有杀菌作用的多糖分子，进而制备了高效环保型生物农药香菇多糖水剂。

附图说明：

图1香菇菌丝体发酵工艺流程图；图2香菇多糖提取工艺流程图。

具体实施方式：

香菇多糖菌种经过罐体液态有氧发酵培养，生产香菇多糖菌丝体。菌丝体经、超声波破壁、碱液提取、超滤膜分离、分子筛筛选，可制备出5万-50万分子量香菇多糖，该方法有效的提取了有杀菌作用的多糖分子。

香菇菌丝体罐体液态发酵培养实施例一：

采用3级发酵培养，香菇多糖菌种经2升摇瓶培养后，接种到50升培养罐中，在50升种子罐培养菌丝体24～28小时，菌丝体壮大后，移种到500升培养罐中，在500升培养罐中培养约30小时，移种到2吨发酵罐中。在2吨罐中经约60小时发酵培养，放罐，得干香菇多糖菌丝40公斤。培养基选择：利用植物油厂下脚料豆粕、麸皮、玉米粉经热水煮沸后，过滤，取其液体做培养基。选葡萄糖、蛋白胨等为主要碳源、氮源，控制pH值在6.5-8.2之间，控制空气通气量、控制发酵温度在25℃-30℃。以还原糖0.45％和氨基氮0.02％为终点控制指标。

此培养工艺缩短了菌株培养时间。充分利用了周边可回收资源。

香菇菌丝体提取香菇多糖实施例二：

后处理第一步：发酵后的香菇菌丝体，经离心除去发酵液后，超微粉碎机剪切匀质后，经超声波振荡破壁，可分离出部分分子量小于2000的多糖，并将菌丝粉加工为超微粉，以利于进一步操作。

第二步，通过温度为50℃-60℃的碳酸氢钠溶液对超微粉进行提取。这一步可直接分离出大部分葡聚糖，简化了后处理工艺。

第三步：碱提后的粗多糖，采用超滤膜分离提取技术，不需加温，可达到脱盐、浓缩、去杂的目的。针对不同的杂质，超滤膜孔径可有多种选择。

第四步：经超滤膜截留的高分子多糖，经过分子筛GPC制备柱筛选，通过截留不同保留时间的流出液，可得5万-50万分子量香菇多糖。