[发明专利]培养吸水链霉菌生产雷帕霉素发酵液的方法

权利要求书

1.培养吸水链霉菌(Strepomyces hygroscopicus ACCC No.40417)发酵生产雷帕霉素发酵液的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

a.平板培养：将吸水链霉菌菌种接种于含有固体培养基的培养皿，接种后恒温培养5-7天；

b.摇瓶种子培养：在三角瓶中装入种子培养基，灭菌后接入平板培养所得的吸水链霉菌菌种，放置在立式摇床上，220-230rpm条件下培养50-70h，得摇瓶种子培养液；

c.种子罐种子培养：将摇瓶种子培养液按照种子罐培养基体积的11％-15％接种量接种于种子罐培养基，200-210rpm条件下培养35-46h，得种子罐种子液；

d.发酵罐发酵培养：将种子罐种子液按照发酵罐培养基体积的11％-15％接种量接种于发酵罐培养基，初始搅拌转速为180-220rpm，培养72-96h，菌体湿重0.22-0.23g/ml时，调节转速为255-300rpm，培养105-150h；发酵罐培养总时间170-230h。

2.如权利要求1所述的培养吸水链霉菌(Strepomyces hygroscopicus ACCC No.40417)发酵生产雷帕霉素发酵液的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

a.平板培养：将吸水链霉菌菌种接种于含有固体培养基的培养皿，接种后于28℃恒温培养5-7天后，取出放于4℃冰箱保存；

b.摇瓶种子培养：在250mL三角瓶中装入50mL种子培养基，灭菌后接入4℃冰箱保存的吸水链霉菌菌种，放置在立式摇床上，于29℃，220-230rpm条件下培养50-70h，得摇瓶种子培养液；

c.种子罐种子培养：将摇瓶种子培养液按照种子罐培养基体积的11％-15％接种量接种于种子罐培养基，于29℃，200-210rpm条件下培养35-46h，得种子罐种子液；

d.发酵罐发酵培养：将种子罐种子液按照发酵罐培养基体积的11％-15％接种量接种于发酵罐培养基，于29℃，初始搅拌转速为180-220rpm，培养72-96h，菌体湿重0.22-0.23g/ml时，调节转速为255-300rpm，培养105-150h；发酵罐培养总时间170-230h，其中，在培养24h和48h时分别一次性补加浓度为1.1％的丙氨酸和浓度为0.5％的赖氨酸。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述固体培养基含有燕麦片、葡萄糖、酵母抽提物、碳酸钙和琼脂。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述固体培养基含有燕麦片30-48g、葡萄糖15-25g、酵母抽提物5-18g、碳酸钙1-4g和琼脂10-20g，pH6.8-7.4。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于所述固体培养基的pH为7.2，并且每升固体培养基含有燕麦片40g、葡萄糖20g、酵母抽提物10g、碳酸钙2g和琼脂16g。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于所采用的种子培养基含有可溶性淀粉、蛋白胨、酵母抽提物、花生粕和甘油。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于所采用的种子培养基含有可溶性淀粉30-48g、蛋白胨2-8g、酵母抽提物5-16g、花生粕4-15g、甘油4-15g和碳酸钙1-4g，pH为6.7-7.3。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于所采用的种子培养基的pH为7.0，并且每升种子培养基含有可溶性淀粉40g、蛋白胨5g、酵母抽提物10g、花生粕10g、甘油10g和碳酸钙2g。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述发酵培养基含有玉米淀粉、黄豆饼粉、蛋白胨、葡萄糖、K₂HPO₄、KH₂PO₄和NaCL。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于所述发酵培养基含有玉米淀粉9-18g、黄豆饼粉4-15g、蛋白胨3-10g、葡萄糖28-42g、K₂HPO₄0-8g、KH₂PO₄1-10g和NaCL1-4g、碳酸钙1-5g和泡敌1-6g，pH为6.5-7.3。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于所述发酵培养基的pH为6.9，并且每升发酵培养基含有玉米淀粉13g、黄豆饼粉10g、蛋白胨6g、葡萄糖35g、K₂HPO₄3g、KH₂PO₄3g和NaCL1g、碳酸钙3g和泡敌3g。