[发明专利]肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种气体的收集方法，尤其涉及一种肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法。 

背景技术

现有的肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法是在一个密闭的环境中收集细胞代谢产生的放射性二氧化碳。 

底部液体为细胞培养液，细胞在瓶底贴壁生长。瓶底中间的柱子，为一支持物，作用是支撑上面的圆柱形的管子，管子内加上二氧化碳的收集液体氢氧化季胺，瓶子的侧臂内加入H₂SO₄。整个体系用橡胶盖密封。 

具体来说其过程如下： 

1、预先在培养瓶侧壁中加入0.3ml 6N H₂SO₄，用橡胶盖密封整个体系； 

2、用医用注射器通过橡胶盖，向瓶底加入细胞和细胞培养液5ml，进行培养，其中，细胞培养液中含有放射性的葡萄糖，可以使细胞通过有氧化而生成放射性的二氧化碳； 

3、培养一段时间后，终止反应。通过注射，向圆柱形管子内加入氢氧化季胺0.5ml，同时将侧臂内的硫酸倒入细胞培养的部位，使硫酸杀死细胞，并充分释放出放射性的二氧化碳； 

4、将整个体系放置在震荡器上，在37℃的条件下震荡3小时； 

5、将收集有放射性二氧化碳的氢氧化季胺抽出来，加入闪烁瓶中，与闪烁液混匀，测量放射性二氧化碳的放射性计数。 

但是这样采用的仪器体积大，计数也不精确，无法适应不同的精确测 量需求。 

发明内容

本发明的目的就是为了解决现有技术中存在的上述问题，提供一种肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法。 

本发明的目的通过以下技术方案来实现： 

肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法，其包括以下步骤：步骤①，将1.0～3.0×10⁶HCT116细胞接种至培养瓶中，培养至细胞贴壁。步骤②，移除原有培养基，加入2～3ml的完全培养基和100μL的放射性培养基，并对培养瓶进行密封；所述的放射性培养基中含有¹⁴C-葡萄糖。步骤③，加入2～3ml氢氧化海胺于闪烁瓶，将闪烁瓶瓶口密封。步骤④，通过真空采血针组件分别连接培养瓶及闪烁瓶，放入37℃培养箱中培养15分钟至3小时。步骤⑤，培养结束时，用医用注射器向培养瓶中一次性注入H₂SO₄，终止细胞代谢反应，将备用细胞计数。步骤⑥，注射完毕后，令注射器活塞退至平衡位置，将整个装置在30～40℃下恒温静置12～24小时。步骤⑦，向闪烁瓶内注入5～10mL闪烁液，并将闪烁瓶内的液体混匀至澄清，避光若干小时后，放入计数仪内，测量每分¹⁴C放射性计数，测定¹⁴CO₂的含量。 

上述的肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法，其中：步骤②所述的¹⁴C-葡萄糖的添加量为0.1～2μCi。 

进一步地，上述的肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法，其中：步骤②所述的完全培养基添加量为2ml。 

更进一步地，上述的肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法，其中：步骤②与步骤③所述的密封分别为用翻口乳胶塞和封口膜密封培养瓶瓶口；用翻口乳胶塞和封口膜密封闪烁瓶瓶口。 

更进一步地，上述的肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法，其中：步骤④所述的真空采血针组件是两端带有针尖的联通导管，其两端的针尖分 别连接培养瓶及闪烁瓶。 

再进一步地，上述的肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法，其中：所述的计数仪为Quantulus 1220低本底液体闪烁计数仪。 

本发明技术方案的优点主要体现在：本发明在实施过程中所采用到的设备体积小，有利于实施中的搬运、灭菌。并且，本发明的实施步骤相对简单，便于操作，值得推广。 

本发明的目的、优点和特点，将通过下面优选实施例的非限制性说明进行解释。这些实施例仅是应用本发明技术方案的典型范例，凡采取等同替换或者等效变换而形成的技术方案，均落在本发明要求保护的范围之内。 

具体实施方式