[发明专利]用于测定莱克多巴胺的免疫生物传感器的制备方法

权利要求书

1.一种用于测定莱克多巴胺的免疫生物传感器的制备方法，其特征在于，通过将纳米金、具有共轭键合偶联莱克多巴胺-牛血清白蛋白的碳纳米管以及普鲁士蓝依次修饰到玻碳电极上，得到电化学免疫传感器。

2.根据权利要求1所述的用于测定莱克多巴胺的免疫生物传感器的制备方法，其特征是，所述的具有共轭键合偶联莱克多巴胺-牛血清白蛋白(BSA)的碳纳米管通过以下方式制备得到：

第一步、将多壁碳纳米管在70℃的H₂SO₄∶HNO₃体积比为3∶1的溶液中超声震荡6小时，得到功能化多壁碳纳米管，将功能化多壁碳纳米管分散在pH值为7.4的磷酸缓冲溶液中并超声振荡分散，得到碳纳米管分散液；

第二步、将上述分散物与2ml含有6mM的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐溶液混合，然后在室温下搅拌20分钟。由此产生的混合物在13000r/m离心15分钟，丢弃上清液，重复第二步若干次以消除过量EDC；

第三步、将0.1mg/mL的莱克多巴胺抗原-BSA与上述溶液以体积比1∶1混合并搅拌后，置于13000r/m下离心15分钟并转移上清液，得到共轭的莱克多巴胺抗原-BSA-多壁碳纳米管结合物；

第四步、将第三步得到的结合物置于1mL5％BSA溶液中浸泡30分钟后，使用PBS缓冲溶液离心3次以上以消除游离的莱克多巴胺抗原与BSA，并将得到莱克多巴胺抗原-BSA-多壁碳纳米管在1mL的PBS缓冲溶液中重新溶解，搅拌形成均匀分散的具有共轭键合偶联莱克多巴胺-牛血清白蛋白的碳纳米管。

3.根据权利要求1所述的用于测定莱克多巴胺的免疫生物传感器的制备方法，其特征是，所述的玻碳电极是指：直径为3mm且分别经1.0和0.3μm的Al₂O₃粉乳液打磨抛光后，在乙醇和水中各超声3min的玻碳电极。

4.根据权利要求1或3所述的用于测定莱克多巴胺的免疫生物传感器的制备方法，其特征是，所述的依次修饰是指：将玻碳电极先沉积金纳米粒子后置于100mg/L的HAuCl₄溶液中在-0.2V电势下恒电位扫描60s；然后在电极表面滴涂4μL莱克多巴胺抗原-BSA-多壁碳纳米管结合物并在室温下干燥5h；再将电极插入含有2.5mM FeCl₃、2.5mM K₃[Fe(CN)₆]、0.1M KCl以及0.1M HCl的普鲁士蓝溶液中在0.4V电势下恒电位扫描40s，再将电极插入含有0.1M KCl和0.1M HCl的溶液中在-0.2至1.1V的电势范围内，以100mv/s的扫速，循环伏安扫描10圈；最后置于37℃下浸泡在5％的BSA溶液中30min。