[发明专利]一种低温型草菇新菌株的诱变方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于食用菌诱变育种技术领域，具体涉及一种低温型草菇新菌株的一种特殊诱变方法和应用。

背景技术

草菇是一种食用菌，营养丰富，味道鲜美，深受广大消费者喜爱。

草菇是典型的热带高温型食用菌，菌丝对低温的抵抗力差，对环境条件的变化尤其是温度的变化很敏感：当平均气温在27℃以下时，草菇子实体难以形成，极不利于草菇的生长发育，极大地影响着草菇的产量和品质，有时甚至造成绝产。故在我国长江以北地区适应期较短，极大地制约了草菇的栽培范围。同时，草菇存在着冷害，即在4℃的低温条件下保存，菌丝会发生自溶而导致菌种死亡和子实体发软、液化直至腐烂。这给草菇的菌种保存和产后保鲜带来了极大的困难。此外，草菇的生物学效率低。因此，培育高产低温的草菇新品种就显得尤为重要。然而，草菇为同宗结合真菌，具有很复杂的生活史，菌丝没有锁状联合，杂种选择缺乏标记，这给草菇的杂交育种带来极大的困难，长期以来草菇产业的优良菌株十分贫乏。

现有技术关于草菇诱变国内对于草菇的诱变只有采用单一方法的诱变，如紫外诱变或化学试剂诱变，诱变结果不稳定。

发明内容

本发明的目的是克服现有草菇诱变技术的不足，提供一种新的复合诱变方法，使草菇基因产生变异，结合合适的0℃低温筛选，从而获得稳定遗传的低温型草菇新菌株。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现：

提供一种低温型草菇新菌株的诱变方法，包括以下步骤：

(1)将草菇菌丝块接种到含有0.6％(W/V)氯化锂的固体PDSA平板上；

所述草菇菌丝块优选0.1×0.1cm大小；具体是可将32℃恒温培养箱培养3d的草菇表面菌丝刮去，切取中上部0.1×0.1cm大小的薄菌丝块接种到含有0.6％(W/V)氯化锂的固体PDSA平板。

(2)将步骤(1)接有菌丝块的含氯化锂的固体PDSA平板置于紫外光线下照射处理后避光培养；

优选将接有菌丝块的含氯化锂的固体PDSA平板置于距离15W紫外灯管的30cm处照射50min，每个水平做三组平行，用锡箔纸包好，避光30℃培养3d。所述紫外灯照射之前先打开预热约20min，使光波稳定。

(3)将经步骤(2)处理后恢复生长的草菇菌丝体切割成薄块，转接到新的PDSA平板，并置于0℃低温处理36～48h，28～33℃正常培养进行筛选。

优选地，将恢复生长的草菇菌丝体切割成0.1×0.1cm大小的薄块。

(4)将步骤(3)中存活的草菇菌丝块继续切割成薄的小菌块，转接至新鲜的PDSA平板上，并按步骤(3)中方法筛选。存活的菌丝用相同的方法进行重复筛选，最后能存活的菌丝即为诱变株；优选重复筛选3～6次。

在本发明方法中，所用的培养基为常规的草菇菌丝培养基，配方为：

PDSA：去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，KH₂PO₄3g，MgSO₄1.5g，维生素B15～10mg，琼脂20g，水1升。

含0.6％(W/V)氯化锂固体培养基配方为：去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，KH₂PO₄3g，MgSO₄1.5g，维生素B15～10mg，氯化锂6g，琼脂20g，水1升。

本发明的方法能有效地使草菇菌丝体发生变异，因此也适用于其他食用菌的菌丝体的诱变，如金针菇、杏鲍菇、平菇等。

紫外线是一种非电离辐射，能引起DNA链的断裂、DNA分子内和分子间的交联、核酸与蛋白质的交联，特别是形成嘧啶二聚体，阻碍DNA双链的解链、复制和碱基的正常配对，从而导致基因突变。由于紫外诱变时存在光复活作用，因此单独紫外诱变效果不明显。氯化锂是一种碱金属卤化物，能导致AT-GC碱基对的转换或导致碱基的缺失，单独使用时也没有明显的诱变效果。通常采用两种方法的结合，即先进行紫外诱变后获得的诱变菌株再使用LiCl进行诱变或先使用LiCl诱变获得诱变菌株后在进行紫外诱变，然而采用这种方式的组合诱变非但没有使草菇突变株的耐寒性增强，有时还使已经获得的突变株耐低温能力丧失。

本发明经过创造性的实验总结得到新的适宜的诱变方案，产生了以下有益效果：