[发明专利]一种蝙蝠葛碱的精制方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种蝙蝠葛碱的精制方法，尤其是采用超临界CO₂萃取和中压氧化铝柱层析结合纯化蝙蝠葛碱的方法。 

背景技术：

蝙蝠葛碱，又名北豆根碱，蝙蝠葛苏林碱。属双苄基四氢异喹啉类生物碱。分子式为C₃₈H₄₄N₂O₆；分子量为624.76；分子结构式如下： 

蝙蝠葛生物碱(主要成分为蝙蝠葛碱Dau和蝙蝠葛苏林碱Ds)经研究发现具有较好的抗心肌缺血、保护脑缺血-再灌注损伤的作用、对人肿瘤细胞PC-3、BT5637增值的影响等作用，且副作用小。周际安等报道，蝙蝠葛碱对二磷酸腺苷、肾上腺素和胶原诱导的体外血小板聚集有明显的浓度依赖性和抑制作用。张长元实验发现Dau可通过减轻兔心肌脂质过氧化作用所造成的损伤，增强SOD活性，提高氧自由基清除能力，对兔心肌缺血再灌注损伤具有一定保护作用。Dau可明显抑制由MM-LDL，MM-VLDL诱导的体外培养单核细胞PDGF-B蛋白量的增高，而其作用机理尚未清楚。有研究表明，Dau是一种神经元钙通道阻滞剂，能显著抑制高K⁺去极化引起的突出体“快相”Ca²⁺内流，但不影响基础Ca²⁺内流。近年来还发现Dau具有抗肿瘤作用，对鼻咽癌细胞株具有细胞毒作用，对人白血病细胞HL60和K526有明显抑制细胞生长的作用，并呈浓度依赖性，能使K562/ADM细胞对阿霉素和长春新碱的IC50降低，细胞内阿霉素和柔红霉素的浓度升高，但对K562/ADM细胞膜表面的糖蛋白P-170的量和分布却没有改变。 

现有工艺有：日本学者经氧化铝柱层析才得到北豆根碱，但氧化铝柱层析溶剂消耗量大，只是用于少量分离；沈阳药科大学采用反流分布分离法制备北豆根碱，产率提高到0.43％，但条件不易控制，溶剂消耗量大，操作复杂。 

中国专利申请号90102172.5公开了一种“从蝙蝠葛中提取蝙蝠葛碱工艺”，采用酸浸取，用碱碱化，沉淀加苯溶解，用碱萃取，加入氯仿中，用碱洗后，再加苯溶解，重结晶2-3次，加酸溶解，用碱碱化，水洗至中性，低温真空干燥即得产品，该方法提取的产品纯度可达97％，但多次使用氯仿、苯等有毒溶剂，污染严重，有机残留较高，成本高，不利于大生产操作。 

中国专利申请号99116493.8公开了“蝙蝠葛提取物及其提取工艺和提取物的应用”，该发明先从蝙蝠葛根茎中得到总碱，经碱化得粗总碱沉淀，再以乙醇提取酚性碱得棕色膏状物，碱溶，过滤，减税溶液加酸中和，滤集沉淀，干燥，得酚性物。该方法所得酚性碱为混合物，所得到的蝙蝠葛碱含量低，反复使用酸碱，对化合物的结构稳定性影响较大。 

中国专利申请号200910232812.8公开了“一种蝙蝠葛碱的制备方法”，该方法采用高效逆流萃取法，该方法条件温和，但制备量低，也使用了苯等有毒试剂。 

发明内容：

本发明所要解决的技术问题是提供一种利于小规模操作，产品含量高，生产安全的蝙蝠葛碱的精制方法。 

为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案： 

一种蝙蝠葛碱的精制方法，其特征在于包含以下步骤： 

1)超临界CO₂萃取：将北豆根总生物碱投入萃取釜中，通入CO₂，乙醇作夹带剂，收集萃取物； 

2)有机溶剂萃取：将上述萃取物用酸性水溶液溶解，滤过，滤液浓缩后，加氨水溶液调节pH至8-10，加入氯仿萃取2-5次，合并得氯仿萃取液； 

3)氧化铝柱层析：将上述氯仿萃取液回收试剂成浸膏状，加入氧化铝中压短粗柱，氯仿-甲醇梯度洗脱，薄层检测，收集蝙蝠葛碱高含量流分段，回收试剂，得粗晶物； 

4)重结晶：将上述粗晶物加入石油醚-乙醇混合溶液回流饱和溶解，结晶2-5次，滤出低温干燥即得产品。 

所述步骤1)中超临界CO2萃取条件为：CO2流量控制为30-40kg/h，提取温度40-50℃，提取压力26-44Mpa，萃取时间为2-6小时，解析压力4-8Mpa，解析温度为52-60℃。 

所述步骤1)中夹带剂用量为原料量的10-20％。 

所述步骤2)中酸性水溶液为pH为1-3的盐酸、硫酸、醋酸水溶液中的一种，用量为3-8 倍。 

所述步骤3)中氧化铝为100-200目的碱性氧化铝，径高比为1∶3-1∶6。