[发明专利]一种假单胞菌及用其对普瑞巴林中间体进行微生物转化的方法无效
| 申请号： | 201010520179.5 | 申请日： | 2010-10-26 |
| 公开（公告）号： | CN101985609A | 公开（公告）日： | 2011-03-16 |
| 发明（设计）人： | 吴薇;杨立荣;吴坚平 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12P41/00;C12R1/38 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 陈昱彤 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 假单胞菌 巴林 中间体 进行 微生物 转化 方法 | ||
1.一种假单胞菌，其特征是：其保藏号为CGMCC No.4184。
2.一种利用权利要求1的假单胞菌对普瑞巴林中间体进行微生物转化的方法，包括如下步骤：
(1)将保藏号为CGMCC No.4184的假单胞菌加入到培养基中进行发酵培养；
(2)按以下方案A或方案B对普瑞巴林中间体进行转化反应，得到转化液，所述普瑞巴林中间体为消旋2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸乙酯：
方案A：将消旋2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸乙酯直接加入经步骤(1)培养后的发酵液中进行转化反应，得到转化液；
方案B：将经步骤(1)培养后的发酵液离心得到湿菌体，先将所述湿菌体加入到磷酸缓冲溶液中，后再加入消旋2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸乙酯进行转化反应，得到转化液；
(3)将所述转化液用溶剂萃取，将萃取得到的有机相脱水后蒸发溶剂得到(S)-2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸乙酯。
3.如权利要求2所述的对普瑞巴林中间体进行微生物转化的方法，其特征在于：
步骤(2)的方案A中，所述消旋2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸乙酯相对于所述发酵液的加入量为1～50g/L；
步骤(2)的方案B中，所述消旋2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸乙酯相对于所述磷酸缓冲溶液的加入量为1～50g/L。
4.如权利要求2或3所述的对普瑞巴林中间体进行微生物转化的方法，其特征在于：步骤(2)的方案B中，所述湿菌体相对于所述磷酸缓冲溶液的加入量为20～100g/L。
5.如权利要求2或3所述的对普瑞巴林中间体进行微生物转化的方法，其特征在于：步骤(2)中，转化反应温度为25～45℃，转化反应时间为10～60h。
6.如权利要求2或3所述的对普瑞巴林中间体进行微生物转化的方法，其特征在于：步骤(2)的方案B中，所述磷酸缓冲溶液的浓度为0.1M、pH为5～9。
7.如权利要求2所述的对普瑞巴林中间体进行微生物转化的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述发酵培养的培养温度25～40℃，培养1～4天。
8.如权利要求2或7所述的对普瑞巴林中间体进行微生物转化的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述培养基的成分为：蛋白胨5～15g/L、甘油0～6g/L、酵母膏1～5g/L、硫酸铵0～4g/L、磷酸二氢钾0～4g/L、氯化钠0.5～10g/L和硫酸镁0～0.5g/L，所述培养基的pH值为6～8。
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