[发明专利]一种快速检测西布曲明及其衍生物的胶体金层析试纸条及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种快速检测西布曲明及其衍生物的胶体金层析试纸条及制备方法，属于生物学免疫方法的检测技术领域。

背景技术

西布曲明是一种中枢神经作用减肥药，具有兴奋、抑食等作用，它有可能引起血压升高、心率加快、厌食、失眠、肝功能异常等危害严重的副作用。因为其价格低廉，且确有一定的抑食减肥功效，屡被一些不法生产企业非法添加入减肥保健品中，牟取暴利。据调查，市面上销售的98%的减肥产品中均添入了这种成分。西布曲明会增加服用者患心脏病及中风的风险，其说明书中也明确列出了高血压控制不理想患者，以及有冠心病、心衰、心律失常和中风的患者属于禁忌服药范畴，如消费者在不知情的情况下服用了含有该成分的减肥保健食品，有可能产生严重的后果，所以，为了保证人民群众的饮食用药安全，我们必须加大力度打击非法添加现象。然而近年来，不法分子非法产生的手段日趋隐蔽，且西布曲明检测方法较复杂，需要精密的分析仪器和专业技术人员，因而造成监管部门监督抽验成本很大，收效却不甚理想。如申请号为200910030401.1的一篇专利：一种快速检测西布曲明的胶体金层析试纸条及制备方法，制备方法采用浸泡工艺，时间长，需要2-3小时，干燥慢，该胶体金层析检测试纸条以胶体金标记的多克隆抗体为基础制备而成，亲和力低，特异性弱，易引起交叉。

发明内容

本发明的目的是为了克服以上的不足，提供一种能快速、灵敏、简便地检测西布曲明及其衍生物的胶体金层析试纸条及制备方法。

本发明是通过以下技术方案来实现：一种快速检测西布曲明及其衍生物的胶体金层析试纸条，用于检测西布曲明及其衍生物，包括衬板，衬板的一端设有样品垫，衬板的另一端设有吸水垫，衬板的中间设有包被膜，样品垫与包被膜之间设有金标结合垫，金标结合垫为吸附西布曲明及其衍生物的金标抗体的聚酯纤维毡，在包被膜上有用西布曲明及其衍生物偶联的载体蛋白溶液包被直线式检测线T线，和用羊抗鼠IgG溶液包被直线式对照线C线，两条线竖向平行排列。衬板为不吸水的PCV韧性材料。包被膜为硝酸纤维素膜，或混合纤维素膜。吸水垫为植物纤维棉纸。西布曲明及其衍生物的金标抗体为胶体金标记的抗西布曲明及其衍生物单克隆抗体复合物，偶联西布曲明及其衍生物的载体蛋白为牛血清白蛋白BSA。

一种快速检测西布曲明及其衍生物的胶体金层析试纸条的制备方法，制备偶联西布曲明及其衍生物的载体蛋白，用于制备相应的检测线T线；制备偶联西布曲明及其衍生物的载体鸡卵清白蛋白，用于制备单克隆抗体，制备西布曲明及其衍生物金标抗体，用于制备吸附西布曲明及其衍生物金标抗体的聚酯纤维毡；制备羊抗鼠IgG抗体，用于制备对照线C线，包括如下步骤：

（A）将西布曲明及其衍生物与载体牛血清白蛋白BSA/鸡卵清白蛋白OVA进行偶联制备人工合成抗原；

a、生成水溶性碳化二亚胺（EDC）：往反应瓶中加入干燥的二甲基甲酰胺（DMF）及那非类原料或拉非类原料，并通N₂保护，在室温下进行搅拌，待二甲基甲酰胺（DMF）完全溶解后，快速称取浓度为 60%的氢化钠（NaH），并将其加入所述反应瓶中，搅拌50-70分钟，直至溶液无气泡产生，然后用注射器吸取溴乙酸乙酯慢慢注入所述反应瓶中，注入完毕后，在室温下搅拌11-13小时，之后将反应液倾入水中分散，以氯仿进行提取，合并提取液，以无水Na₂SO₄进行干燥，之后过滤，再经过减压浓缩后得到固体，加入无水乙醚打浆洗涤所述固体，之后进行过滤，最后真空干燥得到新的固体，此固体为烷基化物；将无水乙醇和上述步骤所得的烷基化物加入新的反应瓶中，进行搅拌分散，再加入NaOH溶液，加热回流反应2小时，停止加热稍冷却后，将反应液转入单口瓶中，减压浓缩得糊状物，再加入水，以盐酸调节至pH值为7-9的液体，以氯仿进行提取，合并提取液，再用饱和食盐水洗一次，以无水Na₂SO₄干燥，过滤，减压浓缩得白色固体，用甲醇重结晶，得白色粉状固体，此固体为水溶性碳化二亚胺（EDC）；