[发明专利]一种胰激肽释放酶分离纯化的方法

权利要求书

1.一种胰激肽释放酶分离纯化过程中脱色除脂的方法，其特征是利用根霉菌发酵产富马酸得到的废弃菌体经碱处理后，加入胰酶粉浸提液中进行吸附反应，从而对胰酶粉浸提液脱色除脂。

2.根据权利要求1所述的胰激肽释放酶分离纯化过程中脱色除脂的方法，其特征在于所述的废弃菌体是将根霉菌经培养得到的菌球进行富马酸发酵结束后，纱布过滤得到。

3.根据权利要求1所述的胰激肽释放酶分离纯化过程中脱色除脂的方法，其特征在于所述的碱处理是将废弃菌体在0.2-2.0mol/LNaoH溶液中煮沸后保持20-30min，纱布过滤取出菌体，用去离子水洗至中性，得到产富马酸根霉菌废弃菌体。

4.根据权利要求1所述的胰激肽释放酶分离纯化过程中脱色除脂的方法，其特征在于所述的吸附反应采用的PH4.5-7.5，优选PH5.5-6.0；温度4-10℃，优选为6-8℃；吸附时间为1-12h，优选为6-8h。

5.根据权利要求1所述的胰激肽释放酶分离纯化过程中脱色除脂的方法，其特征在于经碱液处理后的产富马酸根霉菌废弃菌体直径为0.5-2.0mm，优选为1.0-1.5mm；胰酶粉浸提液中的产富马酸根霉菌废弃菌体的添加量为5g/L-20g/L，优选为10g/L-15g/L。

6.根据权利要求1所述的胰激肽释放酶分离纯化过程中脱色除脂的方法，其特征在于所述的根霉菌为米根霉菌或少根根霉菌。

7.根据权利要求1所述的胰激肽释放酶分离纯化过程中脱色除脂的方法，其特征在于所述的胰酶粉浸提液的制备方法是使用去离子水溶解胰酶粉得到酶液，水和胰酶粉的重量比为30:1-60:1，调节酶液pH4.5-5.5，充分混合后进行高速离心，抽取上清液即胰酶粉浸提液。

8.根据权利要求7所述的胰激肽释放酶分离纯化过程中脱色除脂的方法，其特征在于所述的充分混合是通过摇床对酶液进行充分混合，摇床温度4-10℃、转速100-200 r/min，混合反应时间达12-14h；所述的高速离心为在温度为4-10℃条件下，离心速率为8000-12000 r/min，离心时间为20-30min。

9.一种胰激肽释放酶分离纯化的方法，该方法包括对胰酶粉浸提液依次进行吸附反应和树脂分离纯化，其特征在于利用根霉菌发酵产富马酸得到的废弃菌体经碱处理后，加入胰酶粉浸提液中进行吸附反应对胰酶粉浸提液脱色除脂，再通过树脂进行分离纯化。

10.根据权利要求9所述的胰激肽释放酶分离纯化的方法，其特征在于该方法中所述的树脂为离子交换树脂；所述的离子交换树脂优选型号为QAE-Sephadex、DEAE-Sepharose FF、Amberlite CG-50或Amberlite IRA-938离子交换树脂。