[发明专利]应用双亲性多孔中空碳微球制备固定化酶的方法

权利要求书

1.一种制备固定化酶的方法，包括如下步骤：将双亲性中空碳微球和待固定酶的溶液混合，4-45℃反应0.5-24h，得到固定化酶；所述双亲性中空碳微球按照如下方法制备：在恒温条件下，将酵母在水溶液或水中进行碳化，得到双亲性中空碳微球；所述恒温的温度为180-240℃之间的任一温度。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述恒温的时间为8-14小时。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述酵母为啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)；所述水溶液为己二醛水溶液、NaOH水溶液或HNO₃水溶液；所述酵母与所述水溶液的配比为10-200g酵母∶1L水溶液，优选为200g酵母∶1L水溶液。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述己二醛水溶液为0.01mol/L己二醛水溶液；所述NaOH水溶液为1g/100mL NaOH水溶液；所述HNO₃水溶液为1g/100mL HNO₃水溶液。

5.如权利要求1至4中任一所述的方法，其特征在于：所述待固定酶为水解酶、氧化还原酶、脱氢酶或异构酶；所述水解酶为脂肪酶、β-葡萄糖苷酶、蛋白酶、淀粉酶或纤维素酶；所述氧化还原酶为过氧化氢酶或葡萄糖氧化酶；所述脱氢酶为乙醇脱氢酶；所述异构酶为葡萄糖异构酶。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述固定化酶为固定化脂肪酶；所述待固定酶的溶液由游离脂肪酶和0.02mol/L pH6.0的醋酸-醋酸钠缓冲液组成，脂肪酶浓度为4mg/mL；所述双亲性中空碳微球与所述待固定酶的溶液的配比为0.05g∶2mL；所述反应的参数为：4-25℃，振荡反应12h。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述固定化酶为固定化过氧化氢酶；所述待固定酶的溶液由游离过氧化氢酶和0.05mol/L pH7.0的NaH₂PO₃-Na₂HPO₃缓冲液组成，过氧化氢酶浓度为20-50mg/mL；所述双亲性中空碳微球与所述待固定酶的溶液的配比为0.05g∶4mL；所述反应的参数为：4-25℃，振荡反应0.5-24h。

8.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述固定化酶为固定化葡萄糖氧化酶；所述待固定酶的溶液由游离葡萄糖氧化酶和0.05mol/L pH5.5的NaH₂PO₃-Na₂HPO₃缓冲液组成；葡萄糖氧化酶浓度为20mg/mL；所述双亲性中空碳微球与所述待固定酶的溶液的配比为0.05g∶2mL；所述反应的参数为：30℃，振荡反应6h。

9.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述固定化酶为固定化β-葡萄糖苷酶；所述待固定酶的溶液由游离β-葡萄糖苷酶和0.05mol/L pH4.8的HAc-NaAC缓冲液组成，β-葡萄糖苷酶浓度为1mg/mL；所述双亲性中空碳微球与所述待固定酶的溶液的配比为0.05g∶1mL；所述反应的参数为：45℃，振荡反应2h。

10.权利要求1至9中任一所述方法制备得到的固定化酶。