[发明专利]中国水仙多糖的提取分离方法

说明书

技术领域：

本发明涉及的是一种中国水仙多糖的提取分离方法。

背景技术：

中国水仙(Narcissus tazetta L.var.chinensis Roem)别名金盏银台，是石蒜科(Amaryllidaceae)多年生鳞茎植物，是我国传统十大名花之一，同时也是一种药用植物。中医认为，水仙鳞茎性味苦、寒，入脾、肾、肝经.有清热解毒、散结消肿、祛风除热、活血调经之功效，适用于风热病、五心烦热、月经不调、痈肿疮毒、腮腺炎等。《现代实用中药》记述水仙可“治妇人子宫病.月经不调”。《本草再新》记载水仙可“治痈疽疮毒.排脓消肿.解热，祛风，疗百虫咬伤”。《岭南采药录》则称“取水仙头部捣烂.敷治乳痈：又治一切毒痈病，捣烂敷之能驱毒”。近年国际药学界在对水仙花的药用研究中发现，水仙有明显的抗病毒作用.对部分癌肿也有一定的疗效。《本草纲目》写道“水仙花作香泽涂身，理发去风气”。日本《太和本草》称：″水仙花之根去皮晒干研末和以乳汁，对治眼伤有神效″。据日本《农业杂志》记载：“将根去皮捣烂和以米饭调拌均匀，贴于患处，能治肿痈，对妇女乳房肿痛有特殊疗效”。1980年Tomoda等研究了水仙多糖的结构及其生物活性及其对乳腺癌的疗效。Liu等报道了水仙提取物对癌细胞HL-60具有很好的毒效果。Goh等研究了水仙提取物对储粮害虫玉米象和赤拟谷盗等害虫具有一定的拒食效果。刘静等报道了水仙提取物对人类多发性骨髓瘤细胞系ARH-77增殖和凋亡的作用。

国内外关于水仙的化学成分研究报道甚少，对中国水仙的研究目前仍未空白，还未见任何关于中国水仙多糖的提取分离研究报道。

发明内容：

本发明的目的是提供一种关于中国水仙多糖的提取分离方法，其提取分离方法是基于脂溶性物质溶于乙醇、多糖不溶于乙醇而溶于热水的特点，采用乙醇脱脂、热水提取、三氯乙酸脱蛋白、乙醇分级沉淀法得到水仙粗多糖，采用阴离子交换柱和凝胶柱层析纯化得到精制多糖。

本发明的技术解决方案：中国水仙多糖的提取分离方法，其特征是该方法包括以下步骤：

一、水仙球茎预处理：取新鲜的水仙球茎剥去表面干枯的表皮后清水洗净，切成10mm×10mm的小片，在40～50℃下烘箱干燥1h，去除表面的水分；

二、水仙球茎脱脂：将预处理过的水仙球茎片加入该水仙球茎片3～3.5倍重量的95％乙醇(ml/g)，回流1～1.5h，再经过滤，滤渣经风干、粉碎后用于后续的多糖提取；

三、水仙多糖的提取：脱脂后的球茎粉末用该球茎粉末10～15倍(ml/g)热水在80℃下浸提3～4次，每次浸提时间为6～8h，浸提液经高速离心机离心，得到上清液经旋转浓缩至1/4体积，得到水仙粗多糖水溶液；

四、粗多糖脱蛋白：水仙粗多糖水溶液脱蛋白的方法有Sevage法或三氯乙酸法或等电点法；

五、沉淀法制备水仙粗多糖：经过脱蛋白处理所得到的水仙多糖水溶液，加入3～4倍体积量的95％乙醇进行沉淀，经抽滤所得的滤饼依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤，冷冻干燥去除所含的少量溶剂后得到水仙粗多糖；

六、水仙粗多糖的纯化：将醇沉所得的水仙粗多糖溶于蒸馏水，并制成饱和溶液，经离心除去少量不溶物后，1)采用DEAE-Sephadex A50型离子交换柱初步分离，2)采用梯度洗脱方式(分别采用蒸馏水、0.1mol/L NaCl水溶液、0.5mol/L NaCl水溶液、1.0mol/L NaCl水溶液洗涤)，用苯酚-硫酸法跟踪检测，收集单一峰组分，3)采用透析法去除NaCl离子后再浓缩，4)浓缩液用SephadexG-100进一步分离，用去离子水洗脱，收集单一峰，洗脱液经减压浓缩、冷冻干燥，得到单一多糖组分。

三种不同方法脱除蛋白的效果有较大差异，三氯乙酸法不仅脱蛋白效果好，而且多糖的损失率也小，Sevage法次之，等电点法效果最差。

本发明的有点：以水仙多糖为原料，提取、纯化水仙球茎的胞内、胞外多糖；能够充分提取球茎中的多糖组分，所得多糖纯度高，能充分保持原有的生物活性；制备过程中，只以水和乙醇为溶剂，有效降低了污染，所用的凝胶材料经处理后可多次重复使用，降低了生产成本，适合大规模工业化生产。

具体实施方式

实施例1：