[发明专利]中国水仙多糖的提取分离方法

权利要求书

1.中国水仙多糖的提取分离方法，其特征是该方法包括以下步骤：

一、水仙球茎预处理：取新鲜的水仙球茎剥去表面干枯的表皮后清水洗净，切成10mm×10mm的小片，在40～50℃下烘箱干燥1h，去除表面的水分；

二、水仙球茎脱脂：将预处理过的水仙球茎片加入该水仙球茎片3～3.5倍(ml/g)的95％乙醇，回流1～1.5h，再经过滤，滤渣经风干、粉碎后用于后续的多糖提取；

三、水仙多糖的提取：脱脂后的球茎粉末用该球茎粉末10～15倍(ml/g)热水在80℃下浸提3～4次，每次浸提时间为6～8h，浸提液经高速离心机离心，得到上清液经旋转浓缩至1/4体积，得到水仙粗多糖水溶液；

四、粗多糖脱蛋白：水仙粗多糖水溶液脱蛋白的方法有Sevage法或三氯乙酸法或等电点法；

五、沉淀法制备水仙粗多糖：经过脱蛋白处理所得到的水仙多糖水溶液，加入3～4倍体积量的95％乙醇进行沉淀，经抽滤所得的滤饼依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤，冷冻干燥去除所含的少量溶剂后得到水仙粗多糖；

六、水仙粗多糖的纯化：将醇沉所得的水仙粗多糖溶于蒸馏水，并制成饱和溶液，经离心除去少量不溶物后，1)采用DEAE-Sephadex A50型离子交换柱初步分离；2)采用梯度洗脱方式，分别采用蒸馏水、0.1mol/L NaCl水溶液、0.5mol/L NaCl水溶液、1.0mol/L NaCl水溶液洗涤，用苯酚-硫酸法跟踪检测，收集单一峰组分；3)采用透析法去除NaCl离子后再浓缩；4)浓缩液用Sephadex G-100进一步分离，用去离子水洗脱，收集单一峰，洗脱液经减压浓缩、冷冻干燥，得到单一多糖组分。

2.根据权利要求1所述的中国水仙多糖的提取分离方法，其特征是所述的水仙粗多糖水溶液脱蛋白的方法：

a)Sevage法：水仙粗多糖浓缩液与Sevage试剂等体积混合并充分震摇20min后，去除下层蛋白质，取上层清液并重复萃取5次后，得脱蛋白多糖液；所述的Sevage试剂是氯仿与正丁醇的体积比为氯仿∶正丁醇＝4∶1；

b)三氯乙酸法：往水仙粗多糖浓缩液中加入三氯乙酸，使其浓度达到7％，放置过夜后在3000r/min条件下离心10min，弃去沉淀得脱蛋白糖液，采用同样的方法经过2次脱蛋白，得到脱蛋白多糖液；

c)等电点法：用1mol/L盐酸调节水仙粗多糖浓缩液的pH值至3，放置过夜，在3000r/min条件下离心10min，弃沉淀得脱蛋白液，采用同样的方法经过2次脱蛋白，得到脱蛋白多糖液。