[发明专利]一种血清/血浆miRNA组合物及其应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及一种血清/血浆miRNA组合物及其应用。

背景技术

肝细胞癌(HepatocellμLar Carcinoma，HCC)是全球最常见的恶性肿瘤之一。肝癌的发生是一个多因素、多阶段的过程，就全球而言，慢性HBV和HCV感染是原发性肝细胞癌(HCC)主要的危险因素，尤其是慢性HBV感染与HCC发病呈现高度的地域一致性，与全球75％的肝癌有关，在发展中国家甚至达到85％。

HBV感染后的治疗是一个长期漫长的过程，在这个过程中，病情易出现反复活动，病变常成阶段性进展，越晚越恶劣，越晚越难治，发生肝硬化后，抗病毒治疗也难完全防止其进一步发展，而HCC更是恶性程度最高的肿瘤之一，病程短、进展快、预后极差，5年生存率不到10％。因此，对HBV感染者的病情需要长期动态检测，掌握患者的疾病状态和病情严重程度，对阶段性的进展更应及早诊断以确定针对性的防治方案，最大限度地长期抑制或消除HBV，减轻肝细胞炎症坏死及肝纤维化，延缓和阻止疾病进展，减少和防止肝脏失代偿、肝硬化、原发性肝细胞癌及其并发症的发生，从而改善生活质量和延长存活时间。

目前，血清HBV标志物和甲胎蛋白(AFP)是全世界应用最广泛的HBV感染和HCC生物标志物(Biomarker)，转氨酶则是反映肝脏损伤程度的常用指标，但它们难以反映HBV感染相关疾病的动态进展情况，对相应疾病的早期诊断效果也越来越不能满足需要，如随着影像学的发展，AFP阴性的病例被确诊为肝癌，其诊断肝癌的敏感性仅为40％-60％，特异性为70％-90％；针对肝硬化的诊断和病变程度判断则尚缺乏合适的生物标志物。尽管目前国内外研究者正探索筛选新的生物标志物，以对AFP进行有效的补充，但是难以突破传统生物标志物发展和应用中的瓶颈，即抗体难以制备和定量检测困难。

综上所述，HCC起病比较隐匿，并且预后不良，要加强HBV感染者病情的监控，发现病情变化的早期指针，就需要针对HBV感染不同阶段，获得灵敏、特异、易于检测的标志物。另外，HBV感染和HCC治疗效果有限，要进行治疗效果的早期判断，发现更多有效的治疗靶标，进行靶向治疗就需要动态监测HBV感染和HCC治疗的效果，了解HBV感染的自然史，HCC发生和发展的分子机制，获得易于调控的治疗靶标。因此，寻找一类新型的特异性生物标志物是肝癌防治的当务之急。

肝癌，特别是乙型肝炎相关性肝癌在我国的发病率高，死亡率高，严重危害人们的健康，而乙型肝炎相关性肝癌目前尚无满意的治疗。国内外学者对肝癌开展了广泛而深入的研究，但乙肝病毒与肝癌发生发展的关系尚未完全阐明。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的上述不足，提供在HBV阳性者和HBV阳性的HCC患者表达差异显著的血清miRNA组合物及其应用。

本发明的另一目的在于提供这些miRNA的引物、这些引物的应用以及含有这些引物的试剂盒，为实现肝细胞癌早期诊断提供特异性的中间结果以及迅速的无创伤性检测手段。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

一种血清/血浆miRNA组合物，该miRNA组合物包括下列miRNA：hsa-miR-122、hsa-miR-92a、hsa-let-7c、hsa-miR-23a、hsa-miR-23b、hsa-miR-223、hsa-miR-342-3p、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-375、hsa-miR-99a、hsa-miR-150、hsa-miR-125b及hsa-miR-10a中的任意两种或两种以上。其中hsa-miR-122序列为SEQ ID NO.27，hsa-miR-92a序列为SEQ ID NO.28，hsa-let-7c序列为SEQ IDNO.29，hsa-miR-23a序列为SEQ ID NO.30，hsa-miR-23b序列为SEQ ID NO.31，hsa-miR-223序列为SEQ ID NO.32，hsa-miR-342-3p序列为SEQ ID NO.33，hsa-miR-423-5p序列为SEQ ID NO.34，hsa-miR-375序列为SEQ ID NO.35，hsa-miR-99a序列为SEQ ID NO.36，hsa-miR-150序列为SEQ ID NO.37，hsa-miR-125b序列为SEQ ID NO.38，hsa-miR-10a序列为SEQ ID NO.39。