[发明专利]一种岩生报春组织培养与快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明属于植物组织培养领域，具体地说，涉及一种岩生报春(Primula saxatilis)的组织培养和快速繁殖的方法。

背景技术

岩生报春为报春花科报春属指叶报春组植物，被列入《中国植物红皮书(第二版)》以及《河北省重点保护野生植物名录》。早春开花，花粉红色具有较好的观赏性，在北京露地能顺利越夏越冬，是十分重要的观赏花卉和育种材料。岩生报春是多年生草本花卉，一般采用播种和分株繁殖，但以播种繁殖为主，一般于9月初播种，经过营养生长于次年5月份进入盛花期，从播种至开花时间为8个月，生长周期长，且繁殖系数低。同时，这些方法远不能满足生产需求，且成苗不整齐。

组织培养是快速繁殖优良植物品种的一条重要途径，报春花属已有不少种进行了组织培养的相关报道，但是岩生报春的组织培养在国内外均没有相关研究与报道，因此需要研究岩生报春的组织培养，并形成一套专门的快繁技术体系。

发明内容

本发明的目的是提供一种岩生报春的组织培养与快速繁殖方法，提高岩生报春的繁殖系数、生根率及移栽成活率。

为了实现本发明目的，本发明的一种岩生报春组织培养和快速繁殖方法，包括：种子表面消毒后进行接种，获得无菌苗后，接种腋芽进行丛生芽的诱导，将获得的不定芽进行生根培养和移栽。

其中，所述的种子消毒包括：用清水浸泡种子24h，在超净工作台内先用75％乙醇消毒15～30s，优选为15s，无菌水冲洗5～6次，优选5次，再用质量比为0.1％的升汞溶液消毒6～8min，优选为6min，无菌水洗涤5～6次，优选为5次，接种至MS或者1/2MS培养基中，优选为1/2MS培养基，pH为5.9，光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光1500～2000Lux。1～1.5个月后，将种子萌发获得的无菌苗移至MS培养基中继代，pH为5.9，光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光1500～2000Lux。

其中，所述的丛生芽诱导具体步骤为：取无菌苗腋芽接种在丛生芽诱导培养基MS+2.5mg/l 6-BA+1.0mg/l NAA中，pH为5.9，光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光1500～2000Lux；之后移至相同培养基增殖，继代2～3次。

其中，生根培养和试管苗移栽的具体步骤为：将不定芽接种至生根培养基进行生根。生根培养基为MS或MS+0.1～0.2mg/l NAA，优选为MS+0.1mg/l NAA，pH为5.9～6.0，光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光2500～3000Lux，光照时间为12h/d；温度保持在23～25℃之间。生根培养2～3周，炼苗4～5天后，移至细草炭土中培养，保持湿度高于80％，每天喷水2～3次。

本发明提供的岩生报春组织培养和快速繁殖方法，还包括在所述丛生芽的诱导后将丛生芽的叶片或叶柄接种至愈伤组织诱导培养基上，诱导愈伤组织，并将愈伤组织接种至愈伤组织增殖培养基中进行增殖培养，将增殖后的愈伤组织接种到愈伤组织分化培养基中培养，分化出不定芽。

其中所述的愈伤组织诱导培养基MS+1～2.5mg/l 6-BA+0.5～1.5mg/l NAA，优选为MS+1.5mg/l 6-BA+0.5mg/l NAA中，pH为5.8～5.9，培养的光照条件为先暗培养20d，之后转为光照培养，自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光1500～2000Lux，光照时间为12h/d。

其中所述的愈伤组织增殖培养基为MS+0.5mg/l TDZ+0.5～1.5mg/l 2，4-D中，优选为MS+0.5mg/l TDZ+0.5mg/l 2，4-D，pH为5.8～5.9。其中所述的愈伤组织优选为诱导的初始黄绿色的愈伤组织。

其中，所述的愈伤组织分化培养基MS+10mg/l 6-BA+2mg/lNAA上。所述的用于不定芽的愈伤组织优选为黄绿色块状、质地疏密适中的愈伤组织。