[发明专利]一种贯叶连翘精提取物的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物有效成分的提取方法领域，尤其涉及一种用市售贯叶连翘粗提物制备富含贯叶金丝桃素的贯叶连翘精提取物的方法。

背景技术

贯叶连翘含有多种化学成分，主要有萘骈二蒽酮类、间苯三酚类、黄酮类、挥发油类、氨基酸类、苯丙烷类和咕吨酮类等。其中萘骈二蒽酮类、间苯三酚类和黄酮类被认为是贯叶连翘的主要活性成分。间苯三酚类主要包括贯叶金丝桃素(hyperforin)和加贯叶金丝桃素(adhyperforin)，贯叶金丝桃素为亲脂性成分，对光、热和氧气极不稳定。

已知的贯叶金丝桃素提取方法主要有浸提法与二氧化碳超临界流体萃取法。浸提法是目前运用最广泛、成本最低的方法，但其提取时间较长，提取效率低。二氧化碳超临界流体萃取法是目前较为先进的提取方法，得到的产品纯度也较高，将贯叶连翘用二氧化碳超临界流体萃取之后，再用甲醇和正己烷反复萃取，得到的提取物含有70％的贯叶金丝桃素，但是二氧化碳超临界流萃取法的仪器成本太高，产量较低，在国内还未普及。

传统的贯叶金丝桃素的提取方法，一般是粉碎干燥生药，用有机溶剂浸提。公开号分别为CN1198097和CN1251999的中国发明专利公开了德国威廉施瓦布博士有限公司发明的含有贯叶金丝桃素的稳定提取物，用含水甲醇、含水乙醇、正庚烷作为提取溶剂并在制备时加入足够量的稳定剂，如有机硫醇化物、抗坏血酸及其衍生物，其贯叶金丝桃素含量在0.1％～2％或以上，可长期稳定。公开号为CN1392130A的中国发明专利公开了杨得坡等人发明的贯叶连翘等植物中提取纯化贯叶金丝桃素类成分的方法，纯度可达95％以上。

发明内容

本发明提供了一种利用市售含贯叶金丝桃素3～4％的贯叶连翘粗提物，在低温下超声波辅助萃取制备富含贯叶金丝桃素的贯叶连翘精提取物的方法。

一种贯叶连翘精提取物的制备方法，包括以下步骤：

a)取贯叶连翘粗提物，与乙酸乙酯混合，在冰水浴中进行超声波提取30～60min，制得提取液；所述的乙酸乙酯的体积用量(ml)为贯叶连翘粗提物质量(g)的4～6倍。

所述的贯叶连翘粗提物指一般市售贯叶连翘粗提取物，按照国际通用的质量控制标准，其中金丝桃素的含量在0.3％以上。根据测定，其中贯叶金丝桃素含量为3～4％。

b)将步骤a)所制得的提取液浓缩成含贯叶连翘粗提物0.5～5g/ml的浓缩液，用无机碱调pH值为8～14后，抽滤，取滤液，用无机酸调pH至0～2，用非极性溶剂萃取3～5次，合并非极性溶剂相，减压回收得浸膏，0～20℃真空干燥，制得的贯叶连翘提取物在-20℃避光保存。所述的无机碱为KOH、NaOH或NaHCO₃，所述的无机酸为HCl、H₂SO₄或H₃PO₄。所述的非极性溶剂为低沸点石油醚，所述的低沸点石油醚的沸点在30～60℃。

c)将b)步骤所得贯叶连翘提取物溶解于洗脱剂中进行硅胶柱层析，湿法上柱，经浓缩得到贯叶金丝桃素含量为37～57％的贯叶连翘精提取物。所述的洗脱剂为石油醚、正己烷、醇、酯和有机酸中的一种或几种的混合物。所述的硅胶为柱层析硅胶H或薄层析硅胶H。

步骤a)中超声波提取条件优选为：将用量为5ml/g贯叶连翘粗提物的乙酸乙酯在冰水浴中避光、密闭提取60分钟。

作为优选，步骤b)中先用NaOH调pH＝8，再用20％HCl调pH＝2。

作为优选，c)中硅胶柱层析洗脱剂各组分及其体积比为石油醚∶乙酸乙酯∶乙酸＝80∶19∶1，更优选为石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1。

超声波提取技术的基本原理是利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，加速药物成分进入溶剂，从而提高提出率，缩短提取时间，与索氏提取法相比可免去高温对提取成分的影响。与常规浸提法相比，超声波提取技术具有提取时间短、产率高、无需加热等优点，在这个领域中具有良好的应用前景。

经高效液相色谱检测，采用本发明方法的步骤a)、b)制备得到的贯叶连翘提取物中贯叶金丝桃素含量为11～18％，该浸膏至少在1个月保存期间内稳定，无明显减少。经药理实验证明，该贯叶连翘提取物不仅具有显著的抗抑郁作用，而且可促进动物学习记忆能力。该贯叶连翘提取物再经硅胶柱层析，得到富含贯叶金丝桃素的贯叶连翘精提取物，其中贯叶金丝桃素的含量可达57％。

本发明方法适用于药理试验所需的小批量制备，比较简易，可节省提取时间和空间。

附图说明