[发明专利]一种大黄鱼hepcidin抗菌肽及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域中的鱼类基因工程，特别涉及大黄鱼hepcidin抗菌肽及其制备方法。

背景技术

抗菌肽(Antimicrobial peptides，AMPs)广泛存在于动植物中，是动植物机体免疫反应中的重要角色。Hepcidin是一个在C端保守位点上富含半胱氨酸残基的抗菌肽家族。2000年，Krause A等(1.Krause A，Neitz S，Magert HJ，Schulz A，Forssmann WG，Knappe PS，Adermann K.LEAP-1，a novel highly disulfide-bonded human peptide，exhibits antimicrobial activity[J]FEBS Lett.，2000，480：147-150)从人类血浆中首次发现了LEAP-1(后称为hepcidin)。Hepcidin抗菌肽的C末端保留了半胱氨酸形成的富集区，圆二色(circular dichroism，CD)光谱学特性研究证实，在磷酸缓冲液中hepcidin抗菌肽具有两个稳定的β折叠结构，这一结构与抗菌多肽的胱氨酸(cystin-eknot)结构非常相似。鱼类抗菌肽是鱼类先天免疫的重要组成部分，使用抗菌肽作为药物用于海水养殖鱼类的疾病防治，具有广阔的应用前景。

大黄鱼hepcidin抗菌肽基因(Genebank accession no：EF156401)由258个碱基组成，编码85个氨基酸。同其他已经发现的hepcidin抗菌肽结构一样，大黄鱼hepcidin抗菌肽包括内质网靶向的位于N端的信号肽(前24个氨基酸)，前导肽(35个氨基酸)和位于C端的成熟肽(26个氨基酸)。其中前导肽和成熟肽共同构成了前体pro-hepcidin(2.Ke-Jian Wang，Jing-Jing Cai，Ling Cai，Hai-Dong Qu，Ming Yang，Min Zhang，Cloning and expression of a hepcidin gene from a marine fish(Pseudosciaena crocea)and the antimicrobial activity of its synthetic peptide，Peptides，Volume 30，Issue 4，April 2009，638-646)成熟肽部分含有8个半胱氨酸(3.HunterHN，Fulton DB，Ganz T & Vogel HJ(2002)The solution structure of human hepcidin，a peptide hormone with antimicrobial activity that is involved in iron uptake and hereditary hemochromatosis.J Biol Chem277，37597-37603)，形成4个二硫键结构。但由于此4个二硫键结构较为复杂，因此使得通过化学方法合成大黄鱼hepcidin抗菌肽的技术难度较大，费用昂贵，且难以工业化生产。目前，通过基因工程的方法获得的重组hepcidin抗菌肽往往没有广谱抗菌效果，或者抗菌谱研究不充分(4.Zhang H，Yuan QP，Zhu YP，Ma RY.Expression and preparation of recombinant hepcidin inEscherichia coli[J]Protein.Expr.Purif.，2005，41：409-416；5.Srinivasulu B.，Syvitski R.，Seo J.K.，Mattatall N.R.，Knickle L.C.，Douglas S.E.，Expression，purification and structural characterization of recombinant hepcidin，an antimicrobial peptide identified in Japanese flounder，Paralichthys olivaceus，Protein Expr.Purif.，2008，61：36-44)。

发明内容

本发明的目的在于提供一种大黄鱼hepcidin抗菌肽及其制备方法。

所述一种大黄鱼hepcidin抗菌肽(简写为C-pro-PC-hepc)的氨基酸序列如下：

Met Val Pro Ala Asn Glu Glu Gln Glu Leu Glu Gln Gln Ile Tyr Phe