[发明专利]HE4单抗、多抗制备及相关诊断试剂盒研制

权利要求书

1.一种用于卵巢癌早期诊断、复发监测等用途的诊断试剂盒(双抗体夹心法酶联免疫法)的制备方法，所述试剂盒包括HE4标准蛋白、能与HE4特异结合的单克隆抗体和多克隆抗体、封闭液、酶标抗体、酶底物溶液、终止液和酶标板；

2.一种诊断试剂盒，包括能与HE4糖蛋白特异结合的单克隆抗体，以及与HE4特异性结合的多克隆抗体，其中HE4多克隆抗体包被于酶标板，HE4单克隆抗体作为检测抗体；

3.一种诊断试剂盒，包括针对不同HE4糖蛋白抗原表位的两个单克隆抗体，其中一种单克隆抗体包被于酶标板，另一种单克隆抗体作为检测抗体；

4.权利要求1所述，包括能产生权利要求2、3所述与HE4特异结合的单克隆抗体的杂交瘤细胞；

5.权利要求1所述，包括诱导产生HE4多克隆抗体的方法：1)HE4基因或蛋白免疫动物；

2)收集免疫动物血清，纯化针对HE4的多克隆抗体；

6.权利要求1所述，HE4标准蛋白采用基因工程方法制成，为真核细胞表达的糖蛋白；

7.权利要求6中所述真核细胞为酵母细胞或哺乳动物细胞；

8.权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于所述封闭液为1％明胶溶液；

9.权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于所述酶标抗体为酶标记的种属抗体，其既保有酶的催化活性，也保持了抗体的免疫活性，其中酶可为辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)、碱性磷酸酶(alkaline phosohatase，AP)和亲和素等；

10.权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于所述酶底物溶液中的底物可为邻苯二胺(O-phenylenediamine，OPD)、四甲基联苯胺(3，3′，5，5′-tetramethylbenzidine，TMB)、硝基苯磷酸酯(p-nitrophenyl phosphate，p-NPP)和生物素等；

11.权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于所述终止液为2mol/L H₂SO₄溶液。