[发明专利]纳米金颗粒检测单核苷酸多态性的方法

权利要求书

1.一种纳米金颗粒检测单核苷酸多态性的方法，其特征在于，包括如下步骤：

第一步，利用DNA折纸术构造一个非对称二维图形，制备DNA折纸芯片；

第二步，制备胶体金探针；

第三步，DNA短链与胶体金探针杂交；

第四步，粒径胶体金探针与非对称二维图形DNA折纸芯片连接；

第五步，单核苷酸多态性检测。

2.根据权利要求1所述的纳米金颗粒检测单核苷酸多态性的方法，其特征是，第一步中所述的DNA折纸芯片的制备方法：

(1)把所有要用的100μM订书钉链，包括形成非对称二维图形的、伸出探针的等体积混合，再稀释20倍备用；

(2)在96孔板上混合总量为30μl的溶液：0.025μM订书钉链：22μl；1/2浓度的M13mp18：1μl；1×TAE-Mg2+buffer：7μl。

3.根据权利要求1所述的纳米金颗粒检测单核苷酸多态性的方法，其特征是，第二步中所述的胶体金探针制备方法：

①寡核苷酸与5nm粒径胶体金摩尔浓度比200比1加入10mM磷酸缓冲液中，室温300rpm摇24小时；

②加入终浓度0.1M NaCl，室温300rpm摇48小时；

③4℃，15000rpm离心10分钟，弃上清；

④加入10mM磷酸缓冲液，终浓度0.1M NaCl清洗两次；

⑤加入1x TE；10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH＝8.0，4℃保存；

⑥5nm粒径胶体金探针浓度利用520nm波长紫外吸收峰测定。

4.根据权利要求1所述的纳米金颗粒检测单核苷酸多态性的方法，其特征是，第三步中所述的杂交是指：5nm粒径胶体金探针与10nt DNA短链摩尔浓度比1比1混合，50℃水浴杂交1小时。

5.根据权利要求1所述的纳米金颗粒检测单核苷酸多态性的方法，其特征是，第四步中所述的连接是指：5nm粒径胶体金探针与非对称二维图形DNA折纸芯片摩尔浓度比2比1混合，37℃水浴杂交1小时。

6.根据权利要求1所述的纳米金颗粒检测单核苷酸多态性的方法，其特征是，第五步中所述的单核苷酸多态性检测的步骤：在原子力显微镜成像前，加入报告探针摩尔浓度2倍量的靶核苷酸链，取若干时间点原子力显微镜成像。

7.根据权利要求6所述的纳米金颗粒检测单核苷酸多态性的方法，其特征是，所述的原子力显微镜成像，原本都是有亮点的，在某一时间后，完全互补的已没有亮点，根据分支迁移反应机制，加入两种toehold长短不同靶核苷酸链，单碱基突变的仍有明显亮点。