[发明专利]一种显示细胞增殖活性的靶向细胞染色试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种显示细胞增殖活性的靶向细胞染色试剂盒I，包括：

（1）、试剂A－酶底物1：含固酱紫0.25—1%重量体积比的PVP溶液；

（2）、试剂B－酶底物2：含AS-TR磷酸酯0.5—2%重量体积比的二甲基甲酰胺溶液；

（3）、试剂C：0.05～0.2M醋酸缓冲液，PH5.0～5.5；

（4）、试剂D－酶固定液：含柠檬酸0.5g～1.0g，蒸馏水25～35.0ml，甲醇5～15.0ml， 丙酮50～70.0ml以及氯化镁0.05-0.10g，PH5.0～5.5；

（5）、磷酸盐缓冲液：0.005～0.02M,PH8.0～PH8.5；和

（6）、Mayer苏木素。

2.如权利要求1所述的显示细胞增殖活性的靶向细胞染色试剂盒I，其配制方法为：

（1）、试剂A-酶底物1：固酱紫按0.25-1%重量体积比溶解于10％～50%聚乙烯吡咯 烷酮溶液中，暗处冰浴下进行；

（2）、试剂B-酶底物2：AS-TR磷酸酯按0.5～2%重量体积比溶解于纯二甲基甲酰胺；

（3）、试剂C：0.05～0.2M PH5.0～5.5醋酸缓冲液：甲液：含3H₂O的醋酸钠2～4g， 蒸馏水加至200.ml；乙液：冰醋酸1.2ml，蒸馏水加至200.0ml；以乙液滴定甲液至PH＝ 5.0～5.5；

（4）、试剂D－酶固定液，柠檬酸0.5g～1.0g，蒸馏水25～35.0ml，甲醇5～15.0ml， 丙酮50～70.0ml和氯化镁0.05-0.10g，以100.0g/L氢氧化钠调整PH＝5.0～5.5；

（5）、磷酸盐缓冲液：按经典方法配制；

（6）、Mayer苏木素：将苏木柴0.1g放入蒸馏水100ml中煮沸溶解，再加入硫酸铝钾 5g，和碘酸钠0.02g，搅动直到全部溶解，加入水合氯醛5g和枸椽酸0.1g，加煮沸5min， 冷却、过滤，放置过夜。

3.如权利要求1所述的显示细胞增殖活性的靶向细胞染色试剂盒I，其使用方法为：

染色前配制酶孵育液：取试剂A1滴、试剂B1滴，滴入到试剂C滴瓶中即成孵育液， 轻轻摇晃备用；

染色过程：

（1）、细胞抹片：按沉降法制片，细胞沉降10分钟后加入试剂D固定液500微升，一分 钟后倾去液体；

（2）、加入蒸馏水500微升水洗25～35秒，倾去液体；

（3）、将试剂染色孵育液直接滴入载有细胞的玻片孔内，一次滴入5～8滴；然后将染色 板放入37°C的水浴箱内，30～40分钟；

（4）、倾去染色液，加入500微升缓冲液，洗2遍；

（5）、加入苏木素染液500微升，25～35秒后倾去染液；

（6）、加入缓冲液500微升2—6分钟，倾去液体，2遍；

（7）、自然风吹干，阿拉伯树胶封固；或快速通过95%、100%酒精脱水风干后用中性树 胶封固。

4.如权利要求3所述的靶向细胞染色试剂盒I，其特征在于：所述细胞为宫颈脱落细胞、 食管刷片细胞。

5.一种显示上皮细胞增殖活性的靶向细胞染色试剂盒II，包括：

（1）、试剂A－酶试纸：试纸含有溶于二甲基甲酰胺的酸性磷酸酶底物AS-TR磷酸酯 和溶于PVP的显色剂固酱紫成分；

（2）、试剂B－醋酸盐缓冲液；0.05～0.2mol/L醋酸盐溶液，含10％～50％PVP， PH5.0～5.5；

（3）、试剂C－酶固定液：含柠檬酸0.5～1.0g，蒸馏水25.0～35.0ml，甲醇5.0～ 15.0ml，丙酮50.0～70.0ml和氯化镁0.05-0.1g，PH5.0～5.5；

（4）、试剂D－缓冲液：磷酸盐缓冲液，0.005～0.02M,PH8.0～PH8.5；以及

（5）、Mayer苏木素。