[发明专利]无糖型复方扶芳藤制剂中3种主要活性成分的同时检测方法

权利要求书

1.一种无糖型复方扶芳藤制剂中3种主要活性成分含量的同时检测方法，其特征在于该法采用超声辅助萃取，仅用一个色谱条件就可同时测定制剂中卫矛醇、黄芪甲苷、人参皂苷Rb1的含量。

2.如权利要求1所述的无糖型复方扶芳藤制剂，是由扶芳藤、黄芪、人参(或红参)制备而成的，是不加蔗糖的合剂(口服液)、胶囊或片剂。

3.如权利要求1所述的检测方法，其测定的色谱条件包括：

以HILIC亲水色谱柱为固定相，乙腈-水为流动相，梯度洗脱；柱温为25～30℃；流速为1ml/min；检测器为蒸发光散射检测器。

4.如权利要求1所述的检测方法，其测定的色谱条件为：

以phenomenex Luna HILIC(250mm×4.6mm i.d.，5μm)色谱柱为固定相，乙腈(A)-水(B)为流动相，其梯度洗脱的体积百分比条件是：0～5min 93％A，5～15min 93％～80％A，15～25min 80％A；柱温为25～30℃；流速为1ml/min；检测器为蒸发光散射检测器，色谱柱柱效以黄芪甲苷峰计算不小于15000。

5.如权利要求1所述的检测方法，其试样溶液的制备及测定方法包括：

(1)对照品溶液的制备：

①对照品溶液I的制备：取黄芪甲苷和人参皂苷Rb₁对照品适量，精密称定，置容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得含黄芪甲苷0.5～0.6mg/ml和人参皂苷Rb₁0.1～0.2mg/ml的混合对照品溶液，即得。

②对照品溶液II的制备：取卫矛醇对照品适量，精密称定，置容量瓶中，先加少量水溶解，再加含30％-40％甲醇的水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，制得浓度为0.8～1mg/ml的卫矛醇对照品溶液，即得。

(2)供试品溶液的制备：

①复方扶芳藤胶囊(或片剂)供试品溶液I的制备：取本品装量差异项下的胶囊内容物(或片剂)研细，取相当于原药材15-25克的细粉，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水饱和正丁醇50ml，密塞，超声提取45min，放冷，滤过，残渣用水饱和正丁醇少量多次洗涤，收集滤液和洗涤液，用氨试液洗涤，取正丁醇层水浴蒸干，残留物加甲醇溶解并定容至5ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得供试品溶液I。

②复方扶芳藤胶囊(或片剂)供试品溶液II的制备：取上述供试品溶液I制备项下正丁醇提取后留下的残渣，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入含30％-40％甲醇的水溶液50ml，密塞，称重，超声30min，放冷，补足重量，滤过，取续滤液1ml于5ml容量瓶，加30％-40％甲醇至刻度，摇匀；用孔径为0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液II。

③无糖型复方扶芳藤合剂供试品溶液I的制备：精密吸取相当于原药材15-25克的合剂(口服液)，加水饱和的正丁醇50ml，振摇均匀，超声20min，分取正丁醇层，用氨试液洗涤，弃去氨水层，减压回收正丁醇，残渣用甲醇溶解并定容到5ml，用孔径为0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液I。

④无糖型复方扶芳藤合剂供试品溶液II的制备：取供试品溶液I制备项下正丁醇萃取后留下的下层液，蒸至稠膏状，加适量硅藻土拌样分散均匀，转移至100ml具塞锥形瓶中，精密加入含30％-40％甲醇的水溶液50ml，称重，超声30min，放冷，补足重量，滤过，取续滤液1ml于5ml容量瓶，加30％-40％甲醇至刻度，摇匀；用孔径为0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液II。

(3)测定方法

①黄芪甲苷、人参皂苷Rb₁含量测定法：分别精密吸取黄芪甲苷、人参皂苷Rb₁标准混合溶液5μl、10μl及供试品溶液I 10μl，按权利要求3、4所述的色谱条件注入高效液相色谱仪，测定相应峰面积，以外标两点法对数方程计算，即得。

②卫矛醇含量测定法：分别精密吸取卫矛醇标准溶液2μl、5μl及供试品溶液II 5μl，按权利要求3、4所述的色谱条件注入高效液相色谱仪，测定相应峰面积，以外标两点法对数方程计算，即得。