[发明专利]一种快速检测卫氏并殖吸虫的试剂盒和方法

权利要求书

1.一种快速检测卫氏并殖吸虫的试剂盒，其特征在于：包括DNA裂解液、LAMP反应液、SYBR green I显色液和卫氏并殖吸虫DNA阳性对照液。

2.根据权利要求1所述的一种快速检测卫氏并殖吸虫的试剂盒，其特征在于：还包括Bst大片段聚合酶。

3.根据权利要求1所述的一种快速检测卫氏并殖吸虫的试剂盒，其特征在于：所述的DNA裂解液由细胞裂解液、EDTA、蛋白酶K和RNase A溶液四个试剂配制而成，配制好后，在所述的DNA裂解液中，所述的细胞裂解液的终浓度为7-10μM，所述的EDTA的终浓度为0.5M，所述的蛋白酶K的终浓度为18-20mM，所述的RNase A溶液的终浓度为3-5μM。

4.根据权利要求1所述的一种快速检测卫氏并殖吸虫的试剂盒，其特征在于：所述的LAMP反应液由dATP、dTTP、dGTP、dCTP、甜菜碱、引物FIP、引物BIP、引物F3、引物B3、环引物Loop F、环引物LoopB和MgSO₄溶液十二个试剂配制组成，所述的引物FIP的序列如SEQ ID No：1所示，所述的引物BIP的序列如SEQ ID No：2所示，所述的引物F3的序列如SEQ ID No：3所示，所述的引物B3的序列如SEQ ID No：4所示，所述的环引物LoopF的序列如SEQ IDNo：5所示，所述的环引物LoopB的序列如SEQ ID No：6所示，配制好后，所述的dATP、dTTP、dGTP和dCTP的终浓度均为200μM，引物FIP、BIP、F3、B3的终浓度均为0.2mM，环引物Loop F、LoopB的终浓度均为0.8μM，甜菜碱的终浓度为10μM，MgSO₄的终浓度为10mM。

5.根据权利要求1所述的一种快速检测卫氏并殖吸虫的试剂盒，其特征在于：所述的SYBR green I显色液为1∶10倍稀释液。

6.根据权利要求1或2所述的一种快速检测卫氏并殖吸虫的试剂盒，其特征在于：卫氏并殖吸虫DNA阳性对照液的浓度为32.0-45.0ng/μL。

7.根据权利要求2所述的一种快速检测卫氏并殖吸虫的试剂盒，其特征在于：所述的Bst大片段聚合酶的浓度为8U/μL。

8.一种快速检测卫氏并殖吸虫的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)对被检测的成虫、囊蚴、虫卵的DNA进行提取；

(2)采用恒温加热器技术，利用LAMP反应液进行扩增，；

(3)扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测，紫外灯下观察；

(4)扩增产物经SYBR green I显色液显色后，在凝胶成像系统下观察。

9.根据权利要求8所述的一种快速检测卫氏并殖吸虫的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，采用恒温加热器技术扩增条件为在55-65℃恒温下反应40-50分钟。

10.根据权利要求8所述的一种快速检测卫氏并殖吸虫的方法，其特征在于：所述的LAMP反应液由dATP、dTTP、dGTP、dCTP、甜菜碱、引物FIP、引物BIP、引物F3、引物B3、环引物Loop F、环引物LoopB和MgSO₄溶液十二个试剂配制组成，所述的引物FIP的序列如SEQ ID No：1所示，所述的引物BIP的序列如SEQ ID No：2所示，所述的引物F3的序列如SEQ ID No：3所示，所述的引物B3的序列如SEQ ID No：4所示，所述的环引物LoopF的序列如SEQ IDNo：5所示，所述的环引物LoopB的序列如SEQ ID No：6所示，配制好后，所述的dATP、dTTP、dGTP、dCTP的终浓度均为200μM，引物FIP、BIP、F3、B3的终浓度均为0.2mM，环引物Loop F、LoopB的终浓度均为0.8μM，甜菜碱的终浓度为10μM，MgSO₄的终浓度为10mM的。