[发明专利]编码猪α-干扰素的DNA分子和重组大肠杆菌及其应用有效
| 申请号： | 201010295921.7 | 申请日： | 2010-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN101955942A | 公开（公告）日： | 2011-01-26 |
| 发明（设计）人： | 马凤龙;崔增学;李春荣;刘焕珍;石乔 | 申请（专利权）人： | 崔增学 |
| 主分类号： | C12N15/21 | 分类号： | C12N15/21;C12N1/21;C12P21/02;A61K38/21;A61K9/08;A61P31/14;C12R1/91 |
| 代理公司： | 北京康盛知识产权代理有限公司 11331 | 代理人： | 张良 |
| 地址： | 266000 山东省*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 编码 干扰素 dna 分子 重组 大肠杆菌 及其 应用 | ||
1.一种编码猪α-干扰素的DNA分子，其核苷酸序列为序列表中序列1自5’末端第1-501位。
2.一种表达猪α-干扰素的重组菌，是稳定表达序列表中序列1自5’末端第1-498位所示的DNA分子编码的蛋白的重组大肠杆菌。
根据权利要求2所述的大肠杆菌，其特征在于：所述大肠杆菌为大肠杆菌菌株M15[pREP4]。
3.一种生产猪α-干扰素蛋白的方法，包括如下步骤：
将表达猪α-干扰素的重组菌进行培养，诱导表达猪α-干扰素，收集菌体，破碎菌体，离心收集包涵体，洗涤包涵体，离心收集包涵体；
用含有6-8mol/L盐酸胍的缓冲溶液溶解包涵体，离心收集上清；采用His-蛋白质镍亲和层析树脂纯化上清；
测定上清的蛋白浓度，在冰水浴或者2℃-8℃的条件下，将上清加入到复性液中使蛋白质浓度在75-150μg/mL L，2℃-8℃静置复性20-24小时，获得猪α-干扰素蛋白；所述复性液中盐酸胍0.3-1.0mol/L、尿素0.5-2.0mol/L、精氨酸0.1-1.0mol/L、还原型半胱氨酸1.0-7.0mmol/L、氧化型胱氨酸0.1-2.0mmol/L、Tris-HCl 10-20mmol/L(pH8-11)、EDTA 1.0-5.0mmol/L(pH8.0)；
所述表达猪α-干扰素的重组菌是是稳定表达序列表中序列1自5’末端第1-498位所示的DNA分子编码的蛋白的重组大肠杆菌。
4.根据权利要求3所述的生产猪α-干扰素蛋白的方法，其特征在于：所述大肠杆菌为大肠杆菌菌株M15[pREP4]。
5.鸡α-干扰素蛋白注射液，其活性成分为权利要求3所述生产猪α-干扰素蛋白的方法制备的猪α-干扰素蛋白。
6.根据权利要求5所述的鸡α-干扰素蛋白注射液，其特征在于：含有佐剂和/或稳定剂。
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