[发明专利]一种高产纳豆激酶液体发酵方法

权利要求书

1.一种高产纳豆激酶液体发酵方法，其特征在于采用自选纳豆激酶的高产菌株，以大豆蛋白胨为氮源进行摇瓶阶段的发酵。以豆粕酶解液作为主要的氮源进行10L液体发酵，其过程包括：菌种的选育，豆粕酶解液的制备，高压灭菌，接种，发酵。

2.关于权利要求1的一种高产纳豆激酶液体发酵方法，其特征在于所用菌株为纳豆固体发酵高产菌株H-13经诱变驯化得到的用于液体发酵的高产菌株W-0923，该菌株属枯草芽孢杆菌属纳豆亚种(Bacillus natto)。

3.关于权利要求1所述的摇瓶发酵，其特征在于摇瓶液体发酵培养基的组成为：1％麦芽糖，2％大豆蛋白胨、0.4％KH₂PO₄、0.05％MgSO₄、0.02％CaCl₂。

4.关于权利要求1所述的摇瓶发酵，其特征在于摇瓶发酵的条件为：温度37℃，初始pH为7.2，培养基装液量为20mL/100mL三角瓶，接种量2％，摇床转速为120r/min，发酵周期为24h。

5.关于权利要求1所述的10L发酵，其特征在于所用的氮源为豆粕酶解液，其制备过程是：将豆粕磨碎后加水拌匀，调节pH值至7.0-7.5左右，加入胰蛋白酶，加入量为豆粕重量的2％，55℃水浴5～7个小时，反应结束后，在100℃沸水浴中加热灭活10min，冷却至室温，再经板框过滤，即得豆粕酶解液。

6.关于权利要求1所述的10L发酵，其特征在于10L发酵罐中培养基的组成为：1％麦芽糖，20％豆粕酶解液、0.4％KH₂PO₄、0.05％MgSO₄、0.02％CaCl₂。

7.关于权利要求1所述的10L发酵，其特征在于10L发酵罐中发酵条件为：温度37℃，pH为7.2，接种量2％，搅拌联动控制溶氧，分阶段控制溶氧在30％以上，发酵周期为65-80h。