[发明专利]一种人少突神经胶质瘤标志物MAP2蛋白及其用途

说明书

技术领域

本发明属生物技术和医学领域。涉及人少突神经胶质瘤标志物，具体涉及一种能区分临床上具有化疗敏感的、1P等位基因杂合性缺失(1p Lossofheterozygosity，1p LOH)的人少突神经胶质瘤(Oligoden droglioma，OG)的蛋白标志物MAP2蛋白(microtubuleassociated protein 2，MAP2)及其用途。 

背景技术

生物标志物(biomarker)是指能被客观测量的，指示正常生理或病理过程，或是机体对于药物反应的物理、化学、生物指标。现代肿瘤研究的最关键的问题之一，就是寻找早期检测，诊断分型，治疗监测和预后，以及作为药物靶标的标志物。研究揭示了细胞从正常状态转变为肿瘤的过程中，细胞内蛋白表达谱会发生一系列变化。肿瘤标志物就是在肿瘤发生和发展过程中，由肿瘤细胞合成释放或宿主对肿瘤反应性释放的一类物质。它们具有一定的特异性与灵敏度，可以用作诊断与治疗中的监测指标。 

少突神经胶质瘤属神经胶质瘤，占原发性脑肿瘤的2-5％，占脑胶质瘤的4-15％。据研究报道，肿瘤组织中1p(或1p和19q)等位基因缺失的病人，对化疗反应敏感，并有良好的预后，而不含1p等位基因缺失的病人对化疗反应不敏感，相对预后较差。自1998年始，有研究针对少突神经胶质瘤患者的有关1p等位基因缺失的分子机制，利用候选基因、基因组和蛋白质组的各种方法进行了若干尝试分析，但仍未揭示出1p等位基因缺失患者的化疗敏感性机制，也未能利用生物标志物来作为预测1p等位基因缺失的状态和化疗敏感性。目前常用的1p等位缺失的检测方法有：FISH(荧光原位杂交)和微卫星DNA法，所述方法需要特殊的设备和技术，而且往往过程繁琐，费用昂贵，其中，微卫星DNA法更是需要除患者肿瘤组织样品以外的病人基因组DNA(病人血中获得)，引入了更多的收集，处理等繁琐步骤。 

综上所述，很有必要寻找一种易用于临床检测，可进一步用于预测1p等位基因缺失，或化疗敏感性的标志物，其将具有重大的临床意义，并可据此研究少突神经胶质瘤1p等位 基因缺失样品化疗敏感的机制。 

发明内容

本发明的目的是为克服现有技术的缺陷，提供一种人少突神经胶质瘤标志物MAP2蛋白及其用途。 

该MAP2蛋白可用作人少突神经胶质瘤的蛋白标志物，尤其能用作区分临床上具有化疗敏感的，1P等位基因杂合性缺失的人少突神经胶质瘤的蛋白标志物。 

该MAP2蛋白可用于准确预测具有90％的1P等位基因杂合性缺失，可用于少突神经胶质瘤1p缺失样品化疗敏感的机制研究，以及通过决策树模型等方式预测1p等位基因杂合性缺失的病人的化疗敏感性，为诊断和预后以及治疗提供靶点。 

本发明的另一个目的是提供一种基于iTRAQ-LC-MS/MS技术的蛋白质组分析蛋白质谱，检测MAP2蛋白的方法。 

本发明运用8标的iTRAQ结合LC-MS/MS技术分析离体的少突神经胶质瘤样品，获得差异表达的蛋白。本发明的一个实施例中，为能获得高丰度的蛋白，直接采用离体的肿瘤组织为iTRAQ实验的样本，所获得的差异表达的蛋白直接代表肿瘤本身和与化疗肿瘤生物学相关的肿瘤微环境。 

本发明所述的具有差异表达的差异表达的蛋白，包括如表1所示的一组13种蛋白质，其中优选MAP2蛋白，该MAP2蛋白其分子量为199526Da。 

表1是13个侯选差异表达的蛋白。 

本发明中，在完整离体的肿瘤组织中筛选生物标志物，然后用抗体进行后续验证(免疫印迹和免疫组化)，所获得的差异蛋白MAP2蛋白可以作为区分少突神经胶质瘤病人中1P等位基因杂合性缺失存在与否的候选生物标志物；本发明经网络分析表明肌动蛋白骨架信号途径参与少突神经胶质瘤病人中1P等位基因杂合性缺失的状态选择。 

本发明通过决策树分析模型显示MAP2蛋白是1P等位基因杂合性缺失存在状态的有力预测物。 

本发明的目的通过下述技术方案施现： 

1)组织和标本的准备， 

通过FISH检测55个离体的少突神经胶质瘤样品(包括16个冰冻组织和39个石蜡包埋组织)中染色体1p的缺失情况，检测结果显示，染色体1p等位基因杂合缺失率在WHOII级的少突神经胶质瘤样品中为20/33(61％)，WHOIII级的少突神经胶质瘤样品中为11/22(50％)(如图1所示)； 

2)用三色FISH技术检测组织标本中染色体1p的等位基因的缺失情况，