[发明专利]一种能够筛选并富集实体肿瘤干细胞的新方法

权利要求书

1.一种能够大量传代的实体肿瘤干细胞的培养新方法及新培养基配方。

2.权利1要求所述的快速富集和培养实体肿瘤干细胞的方法由下述几个关键环节组成：

A)制备相互分离的肿瘤细胞悬液，B)无血清的实体肿瘤干细胞培养基的配制，C)抑制干细胞分化成份的添加，D)加快干细胞增殖成份的补给，E)肿瘤干细胞与干细胞培养基的混合、培养和换液。

3.权利1和2要求所述的培养实体肿瘤干细胞的方法及培养基配方，必须在胚胎干细胞培养基或具有类似功能的胚胎干细胞培养基中添加适量的Delta-like4(Dll4)，Jagged 1(Jag1)和FGF2成分。

4.权利1和2要求所述的培养实体肿瘤干细胞的方法及培养基配方，必须在培养基中加入抑制GSK信号通路抑制剂和酪氨酸激酶抑制剂，这些抑制剂包括但不局限于CHIR99021，PD173074，PD184352，PD0325901等。

5.权利1中所要求的培养基配方可包含添加的基础培养基，如DMEM，RPMI1640；添加的浓度范围为0-30％(体积/体积)。

6.权利1要求所述的悬浮肿瘤干细胞培养基配方可制造成不同的培养试剂盒，其中包括不同实体肿瘤干细胞增殖所需要的细胞增殖因子、细胞分化抑制剂。

7.权利1要求的通过使用本发明的方法和/或培养基获得的实体肿瘤干细胞标志物，可用于肿瘤的诊断和治疗效果的评估。

8.权利1要求的通过使用本发明的方法和/或培养基获得的实体肿瘤干细胞可用于化疗药物的筛选、评估和使用。