[发明专利]一种鱼皮胶原蛋白的制备方法

权利要求书

1.一种鱼皮胶原蛋白的制备方法，包括原料处理、提取、盐析、纯化透析干燥步骤，其特征在于，所述原料处理、提取步骤具体包括：

(1)原料处理：清除鱼鳞，将鱼皮剪成碎粒，按照固液比为1∶15～25，将氢氧化钠水溶液加入鱼皮碎粒，1～5℃下浸泡3～5h，用20目筛卷网过滤得鱼皮滤渣，风干；以鱼皮滤渣的体积份为1份，用3～5份的无水乙醚于35～40℃回流3～4h，除去鱼皮的脂肪，然后风干，得到除脂后的鱼皮渣；所述氢氧化钠水溶液的浓度为0.04M～0.05M；

(2)提取：按照固液比为1∶50～70，将0.5～0.6M乙酸加入除脂后的鱼皮渣中，浸提60～80h，40目筛卷网过滤得到含鱼皮胶原蛋白的滤液；重复进行一次。

2.根据权利要求1所述鱼皮胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述原料选自：草鱼、斑点叉尾鮰或罗非鱼的鱼皮。

3.根据权利要求1所述鱼皮胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述盐析步骤为：经终浓度为2.5M氯化钠盐析得到胶原蛋白沉淀。

4.根据权利要求1所述鱼皮胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述纯化透析干燥步骤为：将步骤(3)所得胶原蛋白沉淀溶解于0.5M乙酸，然后先以0.5M乙酸为透析外液进行透析3～5次、再以双蒸水作为透析外液进行透析，直至透析外液检测不到氯离子，以保留分子量100kDa以上的胶原蛋白；收集透析后的胶原蛋白液体，采用冷冻干燥方法进行干燥，得到鱼皮胶原蛋白。

5.采权利要求1所述技术方案得到的鱼皮胶原蛋白，其特征在于，所述鱼皮胶原蛋白的羟脯氨酸含量为8.2～8.5％质量百分数，胶原蛋白纯度平均值为89.92～94.62％；所述鱼皮胶原蛋白含有3种I型胶原蛋白，即116KDa的α1、100KDa的α2肽链以及200KDa的β链。

6.权利要求5所述鱼皮胶原蛋白作为鱼类细胞培养的支持载体的应用。

7.应用权利要求5所述鱼皮胶原蛋白作为鱼类细胞培养的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：将权利要求5所述鱼皮胶原蛋白粉以质量含量0.13～0.15％的量溶解于0.1M乙酸中，并均匀铺满细胞培养瓶、或细胞培养板内表面，作为鱼类细胞培养的支持载体。

8.根据权利要求7所述方法，其特征在于，所述鱼类细胞优选自：草鱼肠道原代上皮细胞、草鱼肝脏原代细胞。